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上海申知心生物科技有限公司
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蛋白酶體可通過切割宿主蛋白生成AMPs直接對抗細菌感染2025/06/03
研究背景蛋白酶體是細胞內負責降解泛素化蛋白質的關鍵復合體,傳統認知集中于其維持蛋白質穩態的功能。然而,Goldberg等人的研究揭示了蛋白酶體在抗細菌天然免疫中的全新角色:通過切割宿主蛋白生成抗菌肽(AntimicrobialPeptides,AMPs),直接參與宿主防御。這一發現突破了蛋白酶體功能的傳統邊界,為理解天然免疫機制提供了新視角,并為開發新型抗生素(尤其是針對多重耐藥菌)提供了潛在策略。研究內容1.蛋白酶體生成AMPs的假設驗證:生物信息學預測:通過模擬蛋白酶體切割位點,發現15%-
大鼠腸系膜淋巴結取材2025/05/30
1.麻醉大鼠;2.打開腹腔,找到盲腸;3.從回盲角延伸至腸系膜根部的位置,找淋巴結;4.在腸系膜的起點處,有一個較大的淋巴結群,由5~6個淋巴濾泡融合而成;5.淋巴結形狀橢圓形;6.淋巴結PAS染色;7.T細胞標記物的免疫組化染色;8.巨噬細胞標記物的免疫組化染色。上海申知心生物科技有限公司(簡稱“申知心生物”),是一家“提供全面、系統、高質量的心血管相關疾病研究服務平臺”的創新型企業,致力于搭建基礎醫學和臨床轉化服務體系并開展基于藥效學評價的臨床前CRO服務,提供各種成熟的心血管疾病模式動物。
人外周血PBMC的CD4+ T細胞磁珠分選2025/05/30
一、人外周血單個核細胞(PBMC)的分離1.3ml抗凝血加入3ml1×PBS進行稀釋。2.在15ml離心管內加入3ml淋巴細胞分離液,再在液面上方平鋪3ml稀釋過的抗凝血,常溫下,水平離心機600g,離心30min。3.吸取中間白膜層細胞,加入15ml離心管中,再加入10ml1×PBS混勻,常溫下,1000rpm,離心10min,棄上清,每管加入2mlMACS緩沖液重懸細胞并計數,調整細胞數量,每個樣本不超過107個細胞。4.2000rpm,離心3min,棄上清。二、磁珠分選1.每管加入40ul
小鼠鼻粘膜取材2025/05/20
1.8周齡的BALB/c小鼠;2.頸椎脫臼處死小鼠,去掉頭部皮膚;3.將剪刀伸進口腔,沿一側下頜剪開小鼠臉頰部;4.分離暴露小鼠上顎;5.用剪刀剪開上顎骨,用鑷子往左右兩側撬開;6.可見覆蓋在左右上頜骨的鼻粘膜及鼻骨中隔兩側的鼻粘膜;7.用眼科鑷夾下鼻粘膜。8.取下的鼻粘膜可用于鼻粘膜蛋白與RNA的提取等實驗。組織學研究小鼠鼻腔黏膜組織分為呼吸區黏膜和嗅區黏膜,結構和功能差異大,疾病模型下病理表現不同。人類和小鼠嗅區黏膜分布差異大。制作小鼠鼻部組織染色不建議直接提取鼻黏膜,分離小鼠頭部后4%多聚
小鼠腦缺血再灌注損傷模型2024/03/05
1.體重22-28g的雄性C57Bl/6小鼠,用5%異氟醚深度麻醉小鼠,然后2.5%異氟醚維持麻醉。2.在頸部中線切開一個切口。3.分離右側的頸總動脈和迷走神經。4.右側的頸總動脈暫時結扎。5.分離右側的頸外動脈和頸內動脈,右側的頸內動脈暫時結扎;右側的頸外動脈頭端結扎,近心端掛線備用。6.隨后,用無菌的1ml注射器針頭在右側頸外動脈上做一個小洞,然后插入線栓,近心端掛線適度的系牢插入右側頸外動脈的線栓,以防止血從小洞中流出;松開右側頸內動脈暫時的結扎線,輕輕送入線栓到大腦中動脈,當感覺到阻力時
心肌細胞的原代培養2024/03/05
1.準備0-1天內的SD大鼠新生鼠。2.用溫的無菌去離子水,輕輕擦拭每只新生鼠。3.用70%的乙醇去除新生鼠身體上的污染物。4.斷頭,取心臟,心臟置于冰的PBSG溶液中。5.除去血液和非心臟組織。6.剪碎心臟組織。7.加入胰酶-膠原酶消化液,每只新生鼠75ul。8.在37°C的搖床培養箱中,以250rpm/5min,消化心肌組織。9.輕輕渦旋,然后離心10秒,丟棄第一次消化的上清液。10.開始第二次消化,250rpm/5min后,輕輕渦旋,然后離心10秒,收集含心肌細胞的上清液到2倍體積的馬血清
腦積水大鼠模型的建立2024/01/09
腦積水大鼠模型的建立腦積水大鼠模型的建立方法:1.雄性SD大鼠、8周齡,戊ba比妥鈉麻醉。2.大鼠頭頸部皮膚去毛后,固定在立體定位上,常規消毒。3.在頸部后面的皮膚上做一個中線切口,鈍性分離肌肉,暴露寰枕膜。4.微量注射器進入寰枕膜失去阻力后停針,注入0.02mL無菌高嶺土懸浮液。5.注射速度6ul/s,注射后停針10min。6.拔針后,用醫用耳腦膠封閉針眼,縫合切口,術后抗感染治療。7.術后每天給大鼠稱重并監測其神經功能缺陷。8.大鼠術后3周,經MRI檢查確認模型成功后,取其腦組織,4%多聚甲
自體血液輸注建立小鼠腦出血模型2024/01/09
自體血液輸注建立小鼠腦出血模型自體血液輸注建立小鼠腦出血模型的模型建立:1.C57BL/6J雄性小鼠,25–30g。2.稱重、麻醉,確認麻醉深度。3.當小鼠失去意識時,在立體定位儀上固定小鼠頭部,用鑷子檢查小鼠頭部的固定情況。4.用兩個耳棒和鼻夾固定小鼠頭部,顱平面水平。5.切開頭皮,確認bregma點,記下坐標。6.在右側頭骨上標記點處鉆一個孔,bregma前0.2mm,深3.5mm,側2.2mm。7.切尾法取小鼠自體血30ul。8.用微量注射器連接抽吸肝素的細管,抽吸血液,以2ul/min的
高血脂癥動物模型可用于研究高血脂癥的發病機制和藥物治療2023/09/08
高血脂癥動物模型是一種重要的實驗工具,用于研究高血脂癥的發病機制和藥物治療。通過利用這些模型,我們可以更好地理解高血脂癥對心血管健康的影響,并為預防和治療高血脂癥提供新的思路和方法。然而,進一步的研究仍然需要結合臨床觀察和其他研究手段,以全面而準確地理解高血脂癥及其相關疾病。常用的高血脂癥動物模型包括小鼠、大鼠、兔子等。這些動物模型可以通過不同的方法誘導高血脂癥,如高脂飲食、基因突變或遺傳改良等。通過建立這些模型,研究人員可以模擬人類高血脂癥的特征,并觀察其對心血管系統的影響。利用高血脂癥動物模
胎鼠海馬神經元的原代培養2023/02/28
一、背景海馬是大腦顳葉內側的一個解剖結構,因為形狀類似海馬稱為海馬體。海馬體的主要組成基本單位是神經元,海馬神經元的生理功能與人的記憶密切相關。一些疾病會使海馬神經元出現損傷,比如常見的阿爾茲海默病、單純皰疹病毒性腦炎、自身免疫性腦炎等等,如果這些疾病出現,就會導致記憶障礙,甚至癡呆的表現。神經細胞是近代神經學科中研究重點之一,神經細胞體外培養是指在體外模擬建立體內生長條件,使神經細胞或神經膠質細胞在其生存和生長并維持其形態和功能的方法。神經細胞體外培養技術已成為當今神經科學研究中的主要方法之一
胎鼠皮層神經元的原代培養2023/02/28
一、背景大腦皮層是調節軀體運動的高級中樞。它由初級感覺區、初級運動區和聯合區三部分構成。人類大腦皮層的神經細胞約有140億個,面積約2200平方厘米,主要含有錐體形細胞、梭形細胞和星形細胞(顆粒細胞)及神經纖維。體外原代培養神經元作為神經科學研究的有力手段,越來越受到廣大科研工作者的重視。由于神經元是一種高度分化的細胞,動物出生后很少分裂,相對于其它細胞而言,神經元在體外更難以存活和生長。因此,體外培養神經元要求的培養方法和營養條件均較為特殊。二、實驗步驟1.無菌條件下,從懷孕18天的SD大鼠腹
煙霧吸入誘發急性呼吸窘迫綜合征大動物模型2021/11/25
背景:急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是多因素的,可由膿毒癥、創傷或肺炎等原發性疾病引起。它是危重病人死亡的主要原因之一,據報道死亡率高達45%。本研究的重點是建立煙霧吸入誘導ARDS的大型動物模型,以期為科學界提供可靠、可重復的孤立性毒性吸入損傷誘導的ARDS大型動物模型。方法:全身麻醉下在超聲引導下放置頸動脈、肺動脈和股動脈導管后,動物(n=21)暴露于煙霧中1至2小時。在整個過程中監測外周血氧飽和度(SpO2)、生命體征和呼吸參數。在煙霧暴露之前、期間和之后采集胸部x光片、頸動脈、股動脈和肺
二甲雙胍、白藜蘆醇和雷帕霉素抑制小鼠肝臟蛋白質組的營養性重編程2021/11/25
澳大利亞悉尼大學StephenJ.Simpson、DavidG.LeCouteur等研究人員合作發現,二甲雙胍、白藜蘆醇和雷帕霉素抑制小鼠肝臟蛋白質組的營養性重編程。該項研究成果于2021年11月11日在線發表在《細胞—代謝》雜志上。研究人類通過使用營養幾何框架來揭示了飲食和藥物對小鼠肝臟蛋白質組的互動和比較效應,這些飲食處理在宏量營養素比例、能量密度和藥物處理(二甲雙胍、雷帕霉素、白藜蘆醇)方面有所不同。飲食能量和剪接體之間有強烈的負相關,飲食蛋白質和線粒體之間有強烈的正相關,在高蛋白質攝入時
倫理審查與科學無關嗎2021/11/10
在本號前文《動物實驗為何要開展倫理審查》中曾提到“在科學界,部分動物實驗的計劃制定者和實施者也存在著否定、不接受或不關注科學研究與動物實驗倫理之間存在關聯的事實”。那么動物實驗的倫理審查與科學或者科學實驗結果真的不相干嗎?答案顯然是否定的。我們都知道實驗動物是生命科學和醫學研究領域內除了設備、信息和試劑外的另一個基本要素。隨著現代科技的發展,科學家們很容易獲得高精尖的儀器設備、高精純的化學試劑和相關研究領域的情報信息。遺憾的是,科學家們在實際工作中,往往非常重視設備、信息和試劑這三個要素,也舍得
冬凌草甲素通過調控UBC9表達對肝星狀細胞增殖、凋亡的影響2021/11/10
目的探討冬凌草甲素對肝星狀細胞增殖、凋亡的影響和分子機制。方法采用不同濃度的冬凌草甲素干預肝星狀細胞(HSC-T6)48h。分別采用噻唑藍(MTT)實驗、流式細胞術檢測HSC-T6細胞增殖和凋亡變化。采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白質印記(Westemblot)檢測泛素結合酶9(UBC9)表達變化。轉染UBC9小干擾RNA(si-UBC9)下調HSC-T6細胞中UBC9表達水平,采用上述方法檢測細胞增殖、凋亡變化。結果冬凌草甲素干預后,HSC-T6細胞增殖抑制率、凋亡率顯著升高,U
槲皮素對鎘致小鼠肝臟脂質代謝紊亂模型的保護效應2021/11/10
目的探究槲皮素對鎘致小鼠肝損傷的保護效應及機制。方法C57BL/6J小鼠分為對照組、鎘組(灌胃氯化鎘)、槲皮素組(灌胃槲皮素)、鎘與槲皮素共處理組(灌胃氯化鎘+槲皮素)。給藥結束后,測定小鼠體質量、血清中谷草轉氨酶(AST)和谷丙轉氨酶(ALT)活性及血清與肝組織中總膽固醇(TC)和三酰甘油(TG)含量;HE染色觀察肝組織病理學變化,油紅O染色觀察肝組織脂滴變化;免疫印跡法檢測脂質合成關鍵酶脂肪酸合成酶(FAS)與分解關鍵酶脂蛋白脂酶(LPL)變化。結果與對照組相比,鎘染毒小鼠體質量顯著下降(P
小鼠脊髓損傷打擊模型精細行為的比較研究2021/11/10
目的探討脊髓損傷小鼠除運動功能障礙外,在自主運動、探索行為和自我照顧行為等家籠(homecage)內精細行為方面的異常表現。方法8周齡雌性C57BL/6小鼠10只,接受T10脊髓打擊造模。另選11只小鼠為假手術組。術后1~5周,每日固定時間將小鼠置于家籠中記錄其精細行為,使用HomeCageScan軟件分析動物32種日常行為所占時間百分比。結果與假手術組動物相比,早期脊髓損傷小鼠的探索行為、自主運動和自我照顧行為中多數行為活動均存在顯著異常(P<0.01),部分行為在損傷后1~5周出現恢復。脊髓
哮喘模型的幾種造模方法2021/01/15
1.小鼠過敏性哮喘模型BALB/c小鼠于第0天和第14天分別腹腔注射0.1mL/只OVA液(0.2mg/mL)和DBP溶液(0.5mg/kg),第21~23天連續3天以0.5%的OVA溶液霧化激發,每天于上午下午固定時間霧化2次,每次20min。霧化過程中觀察小鼠一般行為變化,后一次霧化結束后24小時,小鼠摘眼球取血,取支氣管肺泡灌洗液(BronchialAlveolarLavage,BALF)及肺組織。2.枸櫞酸誘發豚鼠咳嗽實驗取體重200-260g豚鼠,雌雄各半,置于500mL的觀察室內,以
類風濕關節炎模型幾種方法2021/01/15
(一)佐劑誘導型(AA)AA早由Freund于20世紀50年代創立,又稱弗氏佐劑關節炎,介導溶劑分為*佐劑(CFA)和不*佐劑(IFA)。通常用CFA作介導劑,AA模型在T細胞相關致炎通路的藥物篩選上發揮著重要的作用。(二)膠原誘導型(CIA)CIA模型是由Trentham等于1977年*建立的實驗性關節炎動物模型。通過皮下注射Ⅱ型膠原和等量CFA的混合液來建造,來源于雞、小牛和大鼠的Ⅱ型膠原均能引起關節炎癥。CIA是MHC相關型,以T/B淋巴細胞介導的關節炎癥侵蝕為主要特征。(三)膠原抗體誘導
科研項目的設計方法2021/01/07
除了一些安全性評價動物實驗外,我們這里提到的大多數動物實驗都是整體科學研究計劃的一個重要組成部分,動物實驗往往是為了證明或演繹某一科研假說而采取的手段。要進行動物實驗的設計,我們有對一般科學實驗的整體設計進行簡單的論述。廣義來講,科學研究選題是由社會發展和人們生活水平決定的(如癌癥和心血管疾病的發生就和人們所處生活環境有很大的關系);狹義來講,科學研究的選題是由研究機構目標和能力來決定,或由研究者興趣來決定。(一)科研假說的形成科研假說(hypothesis)是科研活動的靈魂,一個立論充分的假說
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