| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/24S |
| 貨號 | BC0860 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質以及其他含蛋白質氮的有機化合物 |
土壤酸性蛋白酶活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0860
規格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑五 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑六 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前加入10 mL試劑六，沸水浴攪拌溶解后待用，用不完的試劑2-8℃保存1個月。
標準品：20μmol/mL 酪*酸溶液。
產品說明：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質以及其他含蛋白質氮的有機化合物的轉化，其水解產物是高等植物的氮源之一。土壤酸性蛋白酶在酸性環境下催化蛋白質水解，與土壤有機質含量、氮素及其他土壤性質有關。酸性條件下，土壤酸性蛋白酶可將酪蛋白水解產生酪*酸；在堿性條件下，酪*酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍，在680nm有特征吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液槍、1mL玻璃比色皿、臺式離心機、研缽、蒸餾水、30-50目篩。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。
二、測定步驟
分光光度計預熱30min 以上，調節波長至680nm，蒸餾水調零。
標準溶液的稀釋：取10μL 20μmol/mL酪*酸標準液，加入990μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.2μmol/mL標準液使用，現用現配。（實驗中每管需要220μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）
樣本測定
| 試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
| 風干土樣（g） | 0.1 | 0.1 | - | - |
| 試劑一（μL） | 200 | 200 | - | - |
| 試劑二（μL） | 100 | - | - | |
| 充分混勻后，37℃水浴/恒溫培養箱中反應24h，期間振蕩5-6 次，使土樣與反應液充分接觸。 | - | - | ||
| 試劑三（μL） | 200 | 200 | - | - |
| 試劑二（μL） | - | 100 | - | - |
| 混勻，10000rpm 室溫離心10min，取上清液待測 | - | - | ||
| 上清液（μL） | 220 | 220 | - | - |
| 0.2μmol/mL標準液（μL） | - | - | 220 | - |
| 蒸餾水（μL） | - | - | - | 220 |
| 試劑四（μL） | 650 | 650 | 650 | 650 |
| 試劑五（μL） | 130 | 130 | 130 | 130 |
| 混勻，40℃水浴或恒溫培養箱培養10min，10000rpm室溫離心10min，取上清液于680nm下讀取各管吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管，計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。（標準管、空白管只需測1-2次，每個測定管需設一個對照管） | ||||
三、土壤酸性蛋白酶活性計算
單位定義：每天每g土樣中產生1μmol的酪*酸為一個土壤酸性蛋白酶活力單位。
土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)=C標準×ΔA測定÷ΔA標準×V反總÷W÷T=0.1×ΔA測定÷ΔA標準÷W
C標準：標準管濃度，0.2μmol/mL；V反總：反應體系總體積，0.5mL；T：反應時間，1d；W：樣本質量，g。
注意事項：
當吸光值大于1時，建議將上清液用蒸餾水稀釋后進行測定，計算時注意乘以稀釋倍數。
實驗實例：
分別稱取2份0.1g土樣于1.5mLEP管中，分別為對照管及測定管。按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測定吸光度，計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.206-0.178=0.028，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤質量計算酶活得：
土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA測定÷ΔA標準÷W= 0.1×0.028÷0.512÷0.1= 0.0547U/g土樣。
分別稱取2份0.1g三葉草土樣于1.5mLEP管中，分別為對照管及測定管。按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測定吸光度，計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.831-0.612=0.219，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤質量計算酶活得：
土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA測定÷ΔA標準÷W= 0.1×0.219÷0.512÷0.1=0.0313 U/g土樣。
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