游離脂肪酸（FFA）含量檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0595
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 
   

1. 試劑一：實驗前，取一個玻璃瓶，按照正 庚烷：無水甲醇：氯仿=24:1:25的比例配制（自備），蓋緊后混勻，大概需要50mL，2-8℃保存。使用后及時封口；

2. 試劑二：將試劑二*倒入試劑二A中40℃加熱震蕩溶解20min，此溶液為飽和溶液，若還有粉劑未溶解，取上清使用即可，2-8℃可以保存3個月；

3. 試劑三：臨用前取1瓶加入13 mL無水乙醇充分溶解，未用完的試劑2-8℃可以保存2周；

4. 標準品：臨用前把試劑轉移到10 mL玻璃瓶中，加入7.8 mL氯仿充分溶解，即為5μmol/mL的棕櫚酸標準溶液，未用完的試劑2-8℃可以保存4周。

產品說明：
FFA既是脂肪水解的產物，又是脂肪合成的底物。血清中FFA的濃度與脂類代謝、糖代謝、內分泌功能有關。
FFA與銅離子結合形成脂肪酸銅鹽，并溶于氯仿；利用銅試劑法測定銅離子含量，即可推算出游離脂肪酸含量。

技術指標：
檢出限：0.0390 μmol/mL
線性范圍：0.05-2 μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
  可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液槍、漩渦混勻器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、一個50mL玻璃瓶、一個10mL玻璃瓶、正 庚烷、無水甲醇、氯仿（*）、冰、無水乙醇和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料”附件

注意事項：
1. 試劑三配制應盡量晚配，可在操作到加入試劑二時，再配制試劑三。
2. 必須保證每管的震蕩頻率及時間一致。
3. 盡量在30min內完成測量。
4. 上層溶液不可以直接加入到96孔板內，并且測完后要密封好再丟棄。
5. 因所用試劑多數為有機溶劑，同一支吸頭多次吸取會造成體積不準確，建議更換吸頭。
實驗實例：

1. 取小鼠血清進行樣本處理，按照測定步驟操作，使用96孔板測得A對照管=0.098、A測定管=0.308、ΔA測定=A測定管-A對照管=0.308-0.098=0.21，帶入標準曲線y =0.6679x+0.019，計算x=0.286，按血清含量計算：

FFA含量（μmol/L）=1000x=1000×0.286=286 μmol/L。
相關發表文獻：

1. Shanming Ruan,Zhiqian Zhang, Xinxin Tian,et al. Compound Fuling Granule Suppresses Ovarian Cancer Development and Progression by disrupting mitochondrial function, galactose and fatty acid metabolism. Journal of Cancer. September 2018;(IF3.182)

2. Tunyu Jian,Yuexian Wu,Xiaoqin Ding,et al. A novel sesquiterpene glycoside from Loquat leaf alleviates oleic acid-induced steatosis and oxidative stress in HepG2 cells. Biomedicine & Pharmacotherapy. January 2018;(IF3.743)

3. Rui Wang,Junhua Yuan,Caishun Zhang,et al. Neuropeptide Y-Positive Neurons in the Dorsomedial Hypothalamus Are Involved in the Anorexic Effect of Angptl9. Frontiers in Immunology. December 2018;(IF3.72)

4. Yao L, Chen S, Li W. Fatostatin inhibits the development of endometrial carcinoma in endometrial carcinoma cells and a xenograft model by targeting lipid metabolism[J]. Archives of Biochemistry and Biophysics, 2020: 108327.

參考文獻：

1. Laurell S, Tibbling G. Colorimetric micro-determination of free fatty acids in plasma[J]. Clinica chimica acta, 1967, 16(1): 57-62.

2. Itaya K. A more sensitive and stable colorimetric determination of free fatty acids in blood[J]. Journal of lipid Research, 1977, 18(5): 663-665.

3. Duncombe W G. The colorimetric micro-determination of non-esterified fatty acids in plasma[J]. Clinica chimica acta, 1964, 9: 122-125.

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