人TNF-β檢測(cè)試劑盒（ELISA）

ELISA操作孵育過(guò)程常見(jiàn)問(wèn)題及解答：

1） 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；

2） 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

3）孵育溫度未按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行，溫度過(guò)高或過(guò)低；
解決辦法：
1） 貼封片或加蓋；

2） 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間和孵育溫度。

通用名稱：人TNF-β檢測(cè)試劑盒（ELISA法）
英文名稱：RayBio® Human TNF-alphβ ELISA Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：TNF-b
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測(cè)樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清液
公司品牌：美國(guó)RayBio
儲(chǔ)存條件：-20℃
檢測(cè)方法：ELISA方法
預(yù)期用途：定量測(cè)定人血清血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的TNF-β的含量
參考價(jià)格：詢價(jià)
供應(yīng)商家：深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司

人TNF-βELISA試劑盒預(yù)期用途
RayBio®人TNF-β細(xì)胞因子酶免試劑盒采用體外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，定量測(cè)定人血清（正常血清和血漿中的人TNF-β濃度低，在該測(cè)定中可能無(wú)法檢測(cè)到），血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的TNF-β的含量。

人TNF-β檢測(cè)試劑盒組成成分
●TNF-β酶標(biāo)板（項(xiàng)目A）——12*8=96孔，包被有抗人TNF-β抗體——4℃ 1個(gè)月
●濃縮洗滌液（20x）（項(xiàng)目B）——20x濃縮溶液 25ml——4℃ 1個(gè)月
●標(biāo)準(zhǔn)蛋白（項(xiàng)目C）——2瓶人類TNF-β。1個(gè)小瓶就夠配制每個(gè)一式兩份的標(biāo)準(zhǔn)品。—— -80℃1個(gè)月
●檢測(cè)抗體TNF-β（項(xiàng)目F）——2瓶生物素化的抗人TNF-α。
●每個(gè)小瓶足以測(cè)定微板的一半。——4℃ 5天
●濃縮HRP-鏈霉親和素（項(xiàng)目G）——200μl 700X濃縮HRP綴合鏈霉親和素——不能保存和重新使用
●一步法TMB底物（項(xiàng)目H）——TMB溶液12ml——N/A
●終止液（項(xiàng)目I）——8ml 0.2M硫酸——N/A
●測(cè)定稀釋劑A（項(xiàng)目D）——30ml稀釋緩沖液，0.09％疊氮化吶防腐劑。——N/A
●測(cè)定稀釋劑B（項(xiàng)目E）——15ml 5X濃縮液——4℃ 1個(gè)月
●將未使用的板條重新裝回到含有干燥劑包的袋中，沿著整個(gè)邊緣重新密封。

人TNF-β檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理
人TNF-β細(xì)胞因子酶免試劑盒使用包被有人TNF-β特異性抗體的96孔酶標(biāo)板，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品被加入到孔中，樣品中存在的TNF-β通過(guò)固相的抗體與孔結(jié)合。洗滌后加入生物素化的抗人TNF-β抗體。 洗去未結(jié)合的生物素化抗體后，將HRP-標(biāo)記的鏈霉素加入到到孔中。 再次洗滌板孔，向孔中加入TMB底物溶液，底物顯色與所結(jié)合的TNF-β量成比例。 加入終止液顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色，并且在450nm處測(cè)量顏色的吸光度值。

人TNF-β檢測(cè)試劑盒存儲(chǔ)
人TNF-β檢測(cè)試劑盒可在-20°C下保存，從裝運(yùn)之日起存放可長(zhǎng)達(dá)1年。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。 試劑盒可以在4℃下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月。 對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存時(shí)，建議儲(chǔ)存在-80°C。

人TNF-β檢測(cè)所需材料（試劑盒內(nèi)不提供）
●能夠測(cè)量450 nm處吸光度的酶標(biāo)儀。
●提供2μl至1 ml體積的精密移液管。
●可調(diào)1-25毫升移液器用于試劑制備。
●100毫升和1升刻度量筒。
●吸水紙。
●蒸餾水或去離子水。
●雙對(duì)數(shù)做圖紙或計(jì)算機(jī)和軟件進(jìn)行ELISA數(shù)據(jù)分析。
●準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品或樣品稀釋液的管子。

人TNF-β檢測(cè)試劑盒檢測(cè)步驟
●使用前將所有試劑和樣品置于室溫（18 - 25oC）。建議所有標(biāo)準(zhǔn)和樣品至少重復(fù)一次。
●根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)標(biāo)記可拆卸的8孔條。
●分別加入樣品和每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品100μl（參見(jiàn)試劑制備步驟3）到適當(dāng)?shù)陌蹇字小Ｉw上蓋子，室溫溫和振蕩孵育2.5小時(shí)
●棄去溶液，用1X洗滌液洗滌4次。使用多通道移液器或自動(dòng)洗板機(jī)洗板，每孔加入洗滌緩沖液（300μl）。每個(gè)步驟中去除液體對(duì)于良好的性能是至關(guān)重要的。洗完后，通過(guò)吸取或傾析清除任何剩余的洗滌緩沖液。倒置板并用干凈的吸水紙吸干印跡。
●每孔加入100μl1X制備的生物素化抗體（試劑制備步驟6）。在室溫下溫和振蕩孵育1小時(shí)。
●棄去溶液。重復(fù)洗滌，如步驟4。
●加入100μl制備的鏈霉親和素溶液（見(jiàn)試劑制備步驟7）。在室溫下溫和搖動(dòng)孵育45分鐘。
●棄去溶液。 重復(fù)洗滌，如步驟4。
●向每個(gè)孔中加入100μlTMB一步底物試劑（項(xiàng)目H）。在室溫下在黑暗中輕輕振蕩孵育30分鐘。
●向每個(gè)孔中加入50μl終止液（項(xiàng)目I）。 立即讀取450 nm處吸光度值。

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