CC96306 EHA101感受態
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- 公司名稱 上海語純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 CC96306
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2024/10/31 10:42:26
- 訪問次數 134
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產品簡介
EHA101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利f平抗性基因Rif，為了便于轉化操作，
此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型 Ti 質粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此質粒含有 vir 基
因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質粒自身的 T
DNA 轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移)。pEHA101 (pTiBo542DT
DNA) 型 Ti 質粒含有篩選標簽：Kan，賦予 EHA101 菌株和卡那m素抗性，適用于玉米、水稻、煙
草等植物的轉基因操作。本公司生產的 EHA101 化學轉化感受態細胞經特殊工藝制作，pK7WGF2
質粒（壯觀m素抗性）檢測轉化效率≥ 104 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
EHA101
化學感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：C58 (RifR) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (KanR) Nopaline
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除胭脂堿型 Ti 質粒 pEHA101 外，無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥ 104 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μl 感受態細胞中，用手撥管底混勻，依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分
鐘（或干冰乙醇浴和-80℃冰凍）、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘；
3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養基，于 28℃振蕩培養 2~3 小時；
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上，倒置放于28 ℃培養箱培養2-3天（當平板只含有轉化所用雙元載體抗生素時，28 ℃培養48 h即可；
平板中同時加入雙元載體抗生素，20 μg/ml Rif 時，需 28℃培養 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif
則需要 28℃培養 72-90 h）。
注意事項
1. 感受態細胞冰浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 利f平濃度不應高于 25 μg/μl，利f平濃度過高不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。
4. 由于 Ti 質粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關抗性基因可以不用添加。
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