BF6007 NAD-蘋果酸酶試劑盒 輔酶Ⅱ
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BF6007
- 產地 北京
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/3/31 14:53:31
- 訪問次數 64
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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/48S |
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貨號 | BF6007 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
主要用途 | ME 廣泛存在于微生物、培養細胞、動物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高 |
NAD-蘋果酸酶(Malic enzyme,NAD-ME)試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
NAD-蘋果酸酶試劑盒 輔酶Ⅱ
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:
ME 廣泛存在于微生物、培養細胞、動物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME 催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應,產生丙酮酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應,是蘋果酸代謝的關鍵酶。 ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物 ME 活性測定較多,已經成為抗氧化研究的熱點。根據輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將ME 分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
測定原理:
NAD-ME 催化NAD+還原成NADH,在 340nm 下測定NADH 增加速率。
組成:
產品名稱 | BF6007-50T/48S | Storage |
提取液: | 60ml | 4℃ |
試劑一:液體 | 40ml | 4℃ |
試劑二:液體 | 20ml | 4℃ |
試劑三:粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑四:粉劑 | 1 瓶 | -20℃ |
說明書 | 一份 |
試劑三:粉劑×1 支,4℃保存;用時加 2ml 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑四:粉劑×1 支,-20℃保存;用時加 1ml 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 ml 石英比色皿和蒸餾水。
樣本的前處理:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 個):提取液體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液),超聲波破碎細菌或細胞
(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 340nm,蒸餾水調零。
2、將試劑一、二、三和四置于 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。如果一次性測定樣本較多,可將試劑一、二、三和四按下表比例配成混合液后置于 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上(現配現用)。
3、操作表:
試劑名稱(μl) | 測定管 |
試劑一 | 600 |
試劑二 | 225 |
試劑三 | 30 |
試劑四 | 15 |
樣本 | 30 |
將上述試劑按順序加入 1 ml 石英比色皿中,混勻,立即記錄 340 nm 波長下初始吸光度A1 和反應 1min
后的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1。
注意:如果ΔA<0.005,可將反應時間延長到 2 分鐘或 5 分鐘。
NAD-ME 活性計算:
按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T= 4823×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。
按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g 組織每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T = 4823×ΔA÷W
按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T =9.646×ΔA
V 反總:反應體系總體積,9×10-4 L;ε:NADH 摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm; V 樣:加入樣本體積,0.03 ml;V 樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應時間,1 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/ml;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。
NAD-蘋果酸酶試劑盒 輔酶Ⅱ