原位PCR儀的校準是確保實驗數據準確性和可靠性的關鍵環節，需結合儀器特性（如溫度控制、光學系統等）進行系統性校準。以下是主要校準要點及方法：

一、溫度校準

?校準點設置?

需覆蓋PCR全溫區（35-100℃），重點包括變性（94-95℃）、退火（50-65℃）、延伸（72℃）等關鍵溫度點，并驗證邊緣溫度線性度8。

?動態性能測試?

要求升溫/降溫速率≥1.5℃/s，超調量≤1℃，穩定時間≤10秒，通過多點校準記錄實際與設定溫度的偏差。

?均勻性檢測?

在加熱模塊不同位置（如96孔板對應點）放置傳感器，zui大溫差應≤±0.5℃，否則需調整模塊或更換部件。

二、光學系統校準

?ROI校準?

通過校準反應板生成目標區數據，修正熒光信號的空間差異，解決特定反應孔無擴增信號的問題。

?背景與純熒光校準?

定期執行以消除光學系統偏差，確保熒光強度檢測的準確性。

三、質控與溯源

?自動質控觸發?

當檢測項目滿足條件（如質控設置修改、初次運行或達到預設周期），系統強制質控檢測，否則無法進行樣本檢測。

?標準物質使用?

需選用高精度標準品（如DNA/RNA標準物質），校準不確定度≤允許誤差的1/3。

?計量規范遵循?

依據JJF1527-2015校準規范，確保量值可溯源，數據跨儀器可比。

四、維護與記錄

?定期校準?：建議每6-12個月或更換關鍵部件后校準。

?記錄保存?：校準證書需包含環境條件、校準點數據等，原始記錄保存至少5年。

若儀器出現異常（如孔間溫差過大或熒光信號異常），需結合上述方法針對性排查。