小鼠子宮韌帶成纖維原代細胞

小鼠子宮韌帶成纖維細胞分離自子宮韌帶組織，子宮韌帶是子宮附件的一部分，其主要功能是固定子宮，子宮韌帶共包括4條韌帶，分別是：子宮主韌帶、子宮闊韌帶、子宮圓韌帶、和骶子宮韌帶。子宮主韌帶為子宮闊韌帶下部兩層腹膜之間的一些纖維結締組織束和平滑肌纖維，較強韌，將子宮頸陰道上部連于骨盆側 壁，它是維持子宮頸正常位置，防止其向下脫垂的主要結構。骶子宮韌帶由平滑肌和結締組織構成，起自子宮頸陰道上部后面，向后繞過直腸的兩側，止于骶骨前面。此韌帶表面蓋以腹膜，形成弧形皺襞為直腸子宮襞。此韌帶向后上牽引子宮頸，并與子宮圓韌帶共同維持子宮的前傾前屈位。子宮闊韌帶位于子宮兩側的雙層腹膜皺襞，呈翼狀，由覆蓋子宮前后壁的腹膜自子宮側緣向兩側延伸達盆壁而成，可限制子宮向兩側傾倒。闊韌帶分為前后兩葉，其上緣游離，內2/3部包 裹輸卵管(傘部無腹膜遮蓋)，外l/3部移行為骨盆漏斗韌帶(infundibulopelvic　ligament)或稱卵巢懸韌帶(suspensory ligament of ovary)，卵巢動靜脈由此穿行。在輸卵管以下、卵巢附著處以上的闊韌帶稱輸卵管系膜，其中有結締組織及中腎管遺跡。卵巢與闊韌帶后葉相接處稱卵巢系膜。卵巢內側與宮角之間的闊韌帶稍增厚稱卵巢固有韌帶或卵巢韌帶。在宮體兩側的闊韌帶中有豐富的血管、、淋巴管及大量疏松結締組織稱宮旁組織。子宮動靜脈和輸尿管均從闊韌帶 基底部穿過。子宮圓韌帶為一對長條狀圓索，由平滑肌和結締組織構成。起于子宮外側緣，輸卵管子宮口的前下方。在子 宮闊韌帶前層覆蓋下，走向前外側，經過腹股溝管，終止于陰阜及大上部之中。為維持子宮前傾位的主要結構。

產品名稱：小鼠子宮韌帶成纖維細胞

組織來源：子宮

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

培養基：基礎培養基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠子宮韌帶成纖維細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

方法簡介

實驗室分離的小鼠子宮韌帶成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的小鼠子宮韌帶成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。