豬雪旺氏原代細胞

豬雪旺氏細胞分離組織；周圍系統中的膠質細胞稱施萬（schwann，又名雪旺細胞）細胞，它沿元的突起分布。施萬細胞包裹在纖維上，這種纖維叫有髓纖維。有髓纖維和無髓纖維的施萬細胞的形態和功能有所差異，施萬細胞的外表面有基膜，能分泌營養因子，促進受損的元的存活及其軸突的再生，參與周圍系統中纖維的構成。施萬細胞的胞核呈長卵圓形，其長軸與軸突平行，核周有少量胞質。由于施萬細胞包在軸突的外面，故又稱膜細胞（neurilemmalcell），它的外面包有一層基膜。施萬細胞外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱膜（neurilemma），光鏡下可見此膜。在有髓纖維發生中，伴隨軸突一起生長的施萬細胞表面凹陷成一縱溝，軸突位于縱溝內，溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜（mesaxon）。軸突系膜不斷伸長并反復包卷軸突，把胞質擠至細胞的內、外邊緣及兩端（即靠近郎氏結處），從而形成許多同心圓的螺旋膜板層，即為髓鞘。故髓鞘乃成自施萬細胞的胞膜，屬施萬細胞的一部分。施萬細胞的胞質除見于細胞的外、內邊緣和兩端外，還見于髓鞘板層內的施－蘭切跡。該切跡構成螺旋形的胞質通道，并與細胞外、內邊緣的胞質相通。

產品名稱：豬雪旺氏細胞

組織來源：神經

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

培養基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：雙極、多極形

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

豬雪旺氏細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

方法簡介

實驗室分離的豬雪旺氏采用 - 膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的豬雪旺氏經S-100免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。