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更新時間:2025-04-20 21:00:08
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能夠把這些復雜的評估分析法由繁化簡,并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。
使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體,無需對細胞培養(yǎng)液進行前處理。抗體主要可以分離出3個洗脫峰。已有研究表明,抗體糖鏈末端的半乳糖數(shù)量越多,在此色譜柱中的保留能力越強,而保留能力越強的洗脫峰,其ADCC活性就越高。
細胞培養(yǎng)液中單克隆抗體的分離
TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來測定和監(jiān)控細胞培養(yǎng)時抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養(yǎng)天數(shù)的細胞培養(yǎng)液,使用Protein A填料對抗體樣品粗純后,再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結果如下圖所示。
抗體細胞培養(yǎng)天數(shù)和產(chǎn)生抗體的變化
隨著培養(yǎng)天數(shù)的延長,抗體的3個洗脫峰會向前側的洗脫峰位移。雖然延長了細胞培養(yǎng)天數(shù),抗體的產(chǎn)量增加,但是由于受到細胞外糖鏈修飾酶的影響,在色譜柱中的保留能力較高的抗體(多糖的末端半乳糖數(shù)量較多的抗體)的洗脫峰反而減少了。因此,可以推定產(chǎn)生的抗體的ADCC活性已經(jīng)降低。
TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途
①確認不同細胞株(CHO細胞、HEK細胞等)中抗體的性狀變化。
②確認多個細胞株篩選時抗體的性狀變化。
③確認當改變細胞培養(yǎng)基添加劑時抗體的性狀變化
④細胞培養(yǎng)過程中隨培養(yǎng)天數(shù)的變化導致抗體性狀變化的確認。
⑤細胞培養(yǎng)規(guī)模放大(更改培養(yǎng)方法)時,確認抗體是否發(fā)生性狀變化。