1儀器和試劑
檢測單元為Waters液相色譜儀是非常靈活的HPLC系統,包WatersTM 717 plus自動進樣器;Waters 600E控 制單元;WatersTM 805數據 處理機和 Waters 2410差示折光儀。液相色譜用試劑為色譜純。
2色譜條件
色譜 柱為 ODS-AM一303柱 (YMC,4.6 mm×250 mm,5肚m),柱溫 40℃,流動相為含 0.1 三氟乙酸的乙腈 一水 (40:60,v/v),流速 1 mL rain~,高純氦氣脫氣 ,進樣量 10 L,分析時間為 45 rain。
3標樣配制
大豆皂甙標 準品,實驗室 自行制備,通過 IR、FAS-MS、 H—NMR和”C_NMR鑒定 ,液相色譜分析為單一峰。稱取 Ba和Bb、Bd和Be、ag和Dg標準品 ,加 甲醇溶解定容至 10 mL,分別配成濃度為0.561和 0.588、0.396和 0.503、0.344和 0.406 mg
mL叫的溶液,作為對照品溶液。分別吸取標準品液10 L,供 HPLC分析。
4試樣制備
大豆冷凍干燥后 剝離胚軸 。將 3 kg大豆胚軸研磨粉碎 ,用 15 L 50 甲醇常溫提取 ,提取液經噴霧干燥得粗粉 562 g。將粗粉用等體積正丁醇一水溶液萃取,取正丁醇層,經減壓蒸餾、冷凍干燥,得總糖甙 223 g。
5測定
稱取總糖 甙 0.1 g,用 甲醇定容 至 50 mL,以Milipore FH 0.5肚m過濾膜過濾后作為樣品供試液。分別吸取供試液 1O L,供 HPLC分析。
6結論
建立了大豆胚軸 中單糖鏈大豆皂甙的液相色譜測定方法。采用差示折光檢測法,結果峰面積值和進樣量之間呈 良好 的線性關系 ,用于單糖鏈大豆皂甙的分析中優于紫外檢測法。所建立的檢測方法靈敏度 、重現性均能滿足一般分析要求 ,可用于大豆皂甙樣品中其它大豆皂甙的分析中。
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