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技術文章
IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定
點擊次數：1732 發布時間：2011-5-23
IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定
IL-4能阻斷IFN對L929細胞的保護作用，其拮抗程度與IL-4濃度相關，據此可通過對L929細胞保護作用的抑制率來反映樣本中IL-4的含量。
（1）、取生長良好的L929細胞傾去培養液，加入0．25％胰酶消化后，充分洗滌細胞，調整細胞濃度至1×105—3×105／mL，每孔加100uL，37℃，5％C02溫箱中培養24h。
（2）、采用9—10日齡雞胚，制備成纖維細胞單層培養，接種適量VSV病毒。當細胞病變達+++—++++時，收獲病毒，并進行病毒TCID50測定。
（3）、將待檢上清和rlL-4分別與4U／mL IFN混合，在L929細胞培養內加100uL。37~C，5％C02溫箱中孵育24h。
（4）、VSV攻擊：每孔加100uL病毒懸液，含200TCID；置37℃，5％C02溫箱培養48h，待病毒對照孔病變達+++—++++，細胞對照正常時，測定結果。
（5）、將培養液全部倒出，用Hanks液洗3次；每孔加入100uL0．5％結晶紫染色液，染10—20rain棄去，Hanks液洗3次，加入95％酒精。放小型振蕩器上振搖15min左右，待細胞內染料*溶解。用分光光度計540nm波長測OD值，以準確客觀地反映細胞存活數量。
（6）、注意事項：
①L929細胞在營養條件不良時，可呈圓形漂浮狀，此時更換培養液可使其恢復為梭形貼壁細胞；
②L929細胞要均勻分散于培養板孔中，否則可能造成某個部位細胞過密，另一部分過稀，將影響細胞單層的形成。
（1）、取生長良好的L929細胞傾去培養液，加入0．25％胰酶消化后，充分洗滌細胞，調整細胞濃度至1×105—3×105／mL，每孔加100uL，37℃，5％C02溫箱中培養24h。
（2）、采用9—10日齡雞胚，制備成纖維細胞單層培養，接種適量VSV病毒。當細胞病變達+++—++++時，收獲病毒，并進行病毒TCID50測定。
（3）、將待檢上清和rlL-4分別與4U／mL IFN混合，在L929細胞培養內加100uL。37~C，5％C02溫箱中孵育24h。
（4）、VSV攻擊：每孔加100uL病毒懸液，含200TCID；置37℃，5％C02溫箱培養48h，待病毒對照孔病變達+++—++++，細胞對照正常時，測定結果。
（5）、將培養液全部倒出，用Hanks液洗3次；每孔加入100uL0．5％結晶紫染色液，染10—20rain棄去，Hanks液洗3次，加入95％酒精。放小型振蕩器上振搖15min左右，待細胞內染料*溶解。用分光光度計540nm波長測OD值，以準確客觀地反映細胞存活數量。
（6）、注意事項：
①L929細胞在營養條件不良時，可呈圓形漂浮狀，此時更換培養液可使其恢復為梭形貼壁細胞；
②L929細胞要均勻分散于培養板孔中，否則可能造成某個部位細胞過密，另一部分過稀，將影響細胞單層的形成。