如何利用激光顯微切割來改善生物標(biāo)記物工作流程

時(shí)間：2022-6-24 閱讀：1061

癌癥研究：快速可再現(xiàn)的生物標(biāo)記物探索

生物標(biāo)記物可用作特定疾病如癌癥的指征標(biāo)記。這樣一來，腫瘤微環(huán)境就容易引起人們的警覺。但在腫瘤區(qū)域和非腫瘤區(qū)域以及腫瘤本身之間存在著明顯的分子差異。這些情況只能通過分離這些區(qū)域的特定的、微小的部分來破譯。

所以，徠卡LMD系統(tǒng)允許直接將樣本收集到下游的分析容器如PCT微管當(dāng)中用于快速組織均質(zhì)化、蛋白質(zhì)提取和酶解。
壓力循環(huán)技術(shù)（PCT, PressureBioSciences Inc.）利用高壓為大規(guī)模分析加快樣本制備。PCT可在1小時(shí)內(nèi)完成對(duì)LMD樣本的處理，更大的活檢組織塊則可在3小時(shí)內(nèi)完成處理。
此聯(lián)用技術(shù)可以高精度、快速地分離腫瘤微環(huán)境。來自不同組織區(qū)域的下游分子分析將帶來重大意義，因?yàn)橄掠畏肿涌梢赃M(jìn)行單獨(dú)分析，而不用再作為混合物加以分析。

激光顯微切割利用激光在細(xì)胞層面切割顯微鏡下的樣品。切割后，徠卡LMD系統(tǒng)利用重力將解剖物收集到試樣下方的容器內(nèi)。

單細(xì)胞精度下的生物標(biāo)記物探索工作流程
徠卡激光顯微切割系統(tǒng)能夠精準(zhǔn)切割您感興趣的單個(gè)細(xì)胞，改進(jìn)您的工作流程。所以工作都在可視化控制之下，不會(huì)污染到周圍組織。

1. 樣本制備

激光顯微切割通常會(huì)用到專門的薄膜切片。LMD的樣本制備較為直觀，可以從組織學(xué)的經(jīng)典制備方法中獲得。
下游蛋白質(zhì)組學(xué)方面，我們推薦使用PET薄膜切片（幾乎不存在軟化劑）或DIRECTOR™切片以滿足*無薄膜消融。
石蠟包埋使組織樣品形成組織，可以切成薄片。或者可以利用冷凍切片來制備樣本切片。
我們將提供最合適您應(yīng)用的LMD切片。

2. 固定和染色

LMD應(yīng)用中可根據(jù)感興趣的結(jié)構(gòu)來對(duì)組織進(jìn)行固定和染色。此處包括了明場(chǎng)和熒光染色。
該步驟可通過染色設(shè)備實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化處理。
絕大多數(shù)染色劑一般都與下游蛋白組學(xué)相容。盡管如此，我們依然有必要做提前的調(diào)查。

3. 可視化和ROI

徠卡LMD系統(tǒng)可自動(dòng)化生成樣品的全玻片圖像概覽，輕松導(dǎo)航至您的感興趣區(qū)域（ROI）。
ADM軟件模塊能夠識(shí)別出您的感興趣區(qū)域并自動(dòng)標(biāo)記形狀，或者您可以手動(dòng)勾勒出形狀。

小鼠大腦，甲酚紫。運(yùn)行ADM軟件模塊前后，自動(dòng)識(shí)別和檢測(cè)神經(jīng)元。
4. 激光顯微解剖

接下來在目測(cè)控制下通過激光切出特定的ROI并直接通過重力作用進(jìn)行收集。
點(diǎn)擊鼠標(biāo)即可分離出癌癥材料或任何其他ROI并進(jìn)行必要的匯集，然后按需要收集到1個(gè)或多個(gè)不同的反應(yīng)容器內(nèi)。
您可以使用標(biāo)準(zhǔn)耗材如PCR試管，或者利用特定的LMD收集裝置將樣本直接收集到下游分析容器內(nèi)如PCT μTubes試管（Pressure BioSciences Inc.），詳見下一步操作。

5. 蛋白質(zhì)制備

小樣本的均質(zhì)化、提取和酶解消化可利用如Pressure BioSciences Inc.的壓力循環(huán)技術(shù)（PCT）來完成。遵循LMD-PCT工作流程可快速、可再現(xiàn)地制備生物肽且整個(gè)過程不超過1小時(shí)（Lee S et al., Cell Reports 2020，doi.org/10.1016/j.celrep.2020.03.066），能夠節(jié)省出數(shù)小時(shí)時(shí)間而且小組織樣本的制備*不用“動(dòng)手"。

6. 分析
通過質(zhì)譜法分析樣本并識(shí)別出生物標(biāo)記物。
典型研究領(lǐng)域