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北京西美杰科技有限公司
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如何應(yīng)對植物組培過程中的污染問題？新型高效方法值得推薦
2019-12-6 閱讀(794)
植物組織培養(yǎng)是20世紀(jì)初發(fā)展起來的一門新興技術(shù)，隨著這項技術(shù)的日益完善，其應(yīng)用也越來越廣泛。但是在組織培養(yǎng)過程中，常常會遇到污染問題使實驗無法進(jìn)行下去，甚至導(dǎo)致整個實驗失敗，給科研和工廠化生產(chǎn)帶來損失。
污染是指在植物組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，終導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。常見的污染類型包括：由霉菌引起的真菌性污染、多由外植體帶菌引起的細(xì)菌性污染、長期多次繼代引起的內(nèi)生菌污染以及農(nóng)桿菌污染等。面對植物組培污染問題，我們通常采取在培養(yǎng)基中加入適量的抗生素（如青霉素、鏈霉素、氯霉素等）來抑菌。但是抗生素一般不穩(wěn)定，遇酸、堿或加熱都易分解而失去活性。而且單一抗生素抑菌容易產(chǎn)生抗藥性，一旦停止使用，污染率就會顯著上升。同時，高濃度的抗生素會影響植物的生長。
圖片1
為解決上述問題，我們推薦專業(yè)植物組培高效廣譜性抗菌劑PPM™，它可以有效預(yù)防和清除由于空氣、滅菌不*、交叉污染、外植體消毒等各種原因?qū)е碌闹参锝M培苗的真菌、細(xì)菌、內(nèi)生菌和農(nóng)桿菌污染。可以加入培養(yǎng)基高溫滅菌；而且在合理使用劑量下，不會對植物的生長產(chǎn)生任何影響。
使用方法如下：
? 常規(guī)污染預(yù)防用量：
一般推薦使用濃度為0.05%-0.2%（1L培養(yǎng)基中加入0.5-0.75ml PPM™）；愈傷增殖， 器官形成，胚性組織發(fā)育等使用濃度為0.05%-0.075%。
2、 種子：PPM™不推薦用于直接處理含有大量的細(xì)菌或真菌孢子的種子滅菌；對于種子離體萌發(fā)，建議先采用傳統(tǒng)方法消毒，然后置于含 2-3%PPM™的全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽溶液中，輕輕攪拌4-12小時，此過程千萬不能添加Tween20和調(diào)節(jié)pH，處理完成以后直接插入含有 PPM™(草本植物0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)。
? 塊莖，球莖和鱗狀物的觀賞植物樣本：將其整體放入消毒劑中攪拌消毒處理以后， 用水沖洗干凈，將材料切成薄片，置于含 4-5%PPM™的全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)液中，輕輕攪拌4-12小時，此過程千萬不能添加Tween20 和調(diào)節(jié)pH，處理完成以后無需沖洗直接插入含有 0.1-0.2%的PPM™的培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)。
3、 將材料浸泡在水中持續(xù)攪拌處理(松軟組織攪拌1小時，硬實組織攪拌2小時)
? 無需沖洗，將處理過的材料直接加入到培養(yǎng)基中即可。對于真菌污染，可在培養(yǎng)基中加入適當(dāng)濃度的PPM™。對于真菌細(xì)菌混合性污染，建議在培養(yǎng)的首月的培養(yǎng)基中加入0.05%-0.2%的PPM™
4、 將污染的材料至于流水中用軟刷刷洗，然后置于含50% PPM™的無菌水溶液中攪拌5-15分鐘；對于細(xì)菌或者混合性污染，建議使用 100% PPM™與 0.6g/L 的檸檬酸無菌水溶液按 1：1 混合的低 pH(2.8-3.2)的酸性溶液處理
? 農(nóng)桿菌的去除
共培養(yǎng)以后，將樣本用無菌水清洗，然后將樣本浸沒在 100% PPM™（補充4X的培養(yǎng)基鹽溶液）中處理2分鐘，取出后用無菌紙吸干后并置于常用抗性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，3 周后，更換到只含有0.05%-0.075% PPM™(無常用抗生素)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
圖片2
? 在所有 PPM™消毒處理外植體的過程中，盡量保證容器的體積足夠大，并使外植體材料所有面積與含PPM的處理溶液充分接觸，以保證消毒效果；
? 50% PPM™ 的處理溶液可以重復(fù)使用但是不推薦，因為使用次數(shù)和效果受外植體的體積與接種密度的影響。將50% PPM™的處理溶液保存在4ºC可適當(dāng)延長其活性，一般可使用不超過10次。如果必要，建議配制2份50% PPM™溶液，一份用于外植體消毒內(nèi)生菌污染，另一份用于消除“培養(yǎng)過程中”的輕度污染材料搶救，第二份溶液在每次處理過后需要用 0.2mm濾器過濾
? 使用方法如下：
