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說明: |
介紹用于RT-PCR的*鏈合成系統進行了優化以合成*鏈cDNA,從純化的poly(A)+或總RNA。這個系統可以檢測RNA的目標從100個基點,至12 KB。的起始材料的量,可以改變從1微克到5微克的總RNA。逆轉錄酶是一個版本的M-MLV逆轉錄,已設計,以減少RNase H活性,并提供增強的熱穩定性。使用酶cDNA的合成在42-55℃下的溫度范圍內,提供更高的特異性,高產量的cDNA,和更完整長度的產品比其他的逆轉錄酶。用于RT由于合成系統還沒有顯著地抑制核糖體和轉移RNA,它可用于從總RNA制備*鏈cDNA的合成。 在*步驟中,使用總RNA或聚(A)+選擇的引物用寡聚(dT),隨機引物,或一個基因特異性引物的RNA進行cDNA合成。在第二步驟中,在一個單獨的管,使用感興趣的基因的特異性引物進行PCR。 儲存及穩定性1年,儲存于-20℃下儲存在-20℃下,用于RT-PCR的*鏈合成系統是穩定的 |
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