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鏈霉菌（放線菌）超聲破碎條件
閱讀：3402發(fā)布時(shí)間：2009-7-7
放線菌屬于原核生物系統(tǒng)進(jìn)化樹上的（G＋C）摩爾百分含量（mol％）高的革蘭氏陽性菌（Eubacteria）分枝類群，它雖然具有原核生物*的分子生物學(xué)特性，但在其不同類群中，細(xì)胞壁的化學(xué)組分變化很大。在做大腸桿菌超聲時(shí)，采用的是400W，破碎5s停5s的方法，效果不錯(cuò)，但是用在鏈霉菌上，由于細(xì)胞壁組成差異一般沒什么效果。 
鏈霉菌（放線菌）超聲破碎前處理一般是配置成一定濃度的菌懸液。使用超聲破碎時(shí)采用的具體條件是：
（1）取細(xì)菌的24 h培養(yǎng)液于5 000 r／min 下離心5 min收集菌體。
（2）用pH 7．5的Na2HPO -NaH2PO 緩沖液洗滌3次，再用該緩沖液將菌體配成1：3的菌懸液。置于40 mL大塑料試管內(nèi)。
（3）將大塑料試管置于冰浴中，采用超聲波破碎（功率200W，1／2”探頭，破碎30s，間歇30s）。
（4）破碎液于12 000 r／min下高速冷凍離心30 min，收集細(xì)胞碎片和上清夜。洗滌菌體也可以用預(yù)冷的生理鹽水或pH8的Tris－HCl，洗滌一次就可以。另外，超聲劑量隨樣品量、菌體改變比較大，功率可以到400－600w，破碎5s，停5s，冰浴，要加終濃度1 mM的PMSF。為確定合適的超聲強(qiáng)度和次數(shù)，有必要隨時(shí)鏡檢觀察菌體是否*破碎。
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