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[器材和試劑]

●  L8—M Beckman超速離心機(jī)或與其相當(dāng)?shù)臋C(jī)型

●  吊桶式SWTi4l轉(zhuǎn)頭或相當(dāng)類型

●  氯化銫（Sigma）

●  PBS

●  純化的噬菌體樣本

 

[方法]

1．在每毫升zui后的噬菌體懸液（例如來自實(shí)驗(yàn)方案13．11）中，加入0．45 g氯化銫，充分混勻至溶解。

2．用吊桶式轉(zhuǎn)頭  （或與其相當(dāng)?shù)男吞?hào)）  離心溶液，15℃17h，噬菌體將濃縮在組分1和組分2中（。組分1的濃度較高，但組分2的體積較大。用巴氏滴管或塑料注射器吸取這些組分。如果是*次使用本實(shí)驗(yàn)方案，那么先收集所有條帶并分別對其檢測將是明智之舉。

3．將收獲的溶液對PBS透析過夜。

4．通過感染大腸桿菌DH5cF，或TGl滴定各個(gè)不同組分中噬菌體，并保存滴度zui高的組分。通常，噬菌體會(huì)集中在1個(gè)區(qū)帶內(nèi)，而較少的數(shù)量會(huì)分散在其他區(qū)帶（如果可見）。加入甘油至10％；按每份樣本10¹³個(gè)噬菌體等量分裝并儲(chǔ)存于-80℃。更進(jìn)一步的質(zhì)量控制則可進(jìn)行蛋白雜交印跡，采用抗標(biāo)簽抗體或抗pⅢ抗體。

用氯化銫純化噬菌粒。

離心后離心管外觀如圖示。噬菌體主要濃縮于碎片樣區(qū)帶（組分1）和其下的乳白色區(qū)帶（組分2）。兩條區(qū)帶均需收集