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    取均漿后的供試肝樣，作為供試試料。

    取均漿后的空白肝樣，作為空白試料。

    取均漿后的空白肝樣（1土0．05）e添加lOOng／m1的克倫特羅對(duì)照溶液20tzL作為2ng／g空白添加試料。

    a：提取（肝）  取（1士o．05）z試料，置50ml離心管中；加鹽酸溶液5．Omi，旋渦混勻，中速振蕩1．5h；在10—15~C下以4000r／mill以上速度離心15min；上清液移人另一50ml離心管中，加入氫氧化鈉溶液300gL，混勻，振蕩15min；加o．5mol／l磷酸二氫鉀溶液4．Omi，混勻，2—8~C放置過(guò)夜；取上述溶液于10～15~C以4000r／111113以上的速度離心15min，上清液備用。

    b．凈化（肝）  C，，固相萃取柱依次用無(wú)水甲醇3mi、o．05mol／L磷酸二氫鉀溶液2mi預(yù)洗，不使柱床干涸；將備用上清液全部過(guò)柱；用o．05mol／L磷酸二氫鉀溶液2ml淋洗，擠干，棄去所有淋洗液；用無(wú)水甲醇2mi洗脫，流速控制在o．5ml／mm以下，擠干，收集洗脫液；于50～60~C下用氮?dú)饣蚩諝饩従彺蹈上疵撘海粴堄辔镉盟?．Omi溶解，以4000r／mill以上的速度離心15rain，清液作為試樣溶液供酶聯(lián)免疫測(cè)定法測(cè)定。

    ③測(cè)定

    a．室溫應(yīng)控制在19～30~C。

    b．取在19—30~C放置1—2h的試劑盒，按每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液至少兩孔計(jì)算所需酶聯(lián)板條的數(shù)量，插入框架。每個(gè)微孔加入用緩沖溶液100倍稀釋的抗體100~tL，封口膜封板，室溫孵育30min。

    c倒出孔內(nèi)液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi)沒(méi)有殘余液體。用多道移液器加水250pL到酶聯(lián)板的微?L內(nèi)，稍后倒出孔內(nèi)液體，再將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，如此重復(fù)操作洗板3次。

    d．分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白試料、空白添加試料和供試試料各20uL，分別放入不同微孔底中央，并在每孔內(nèi)加入用緩沖溶液100倍稀釋的酶結(jié)合物100~I。，在微型振蕩器上混勻，用封口膜封好，室溫孵育30min。

    e．倒出孔內(nèi)液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi)沒(méi)有殘余液體，重復(fù)洗板3次。

    f．用多道移液器加入用底物緩沖溶液10倍稀釋的底物100uL，室溫避光孵育15min。

    g．用多道移液器每孔加終止液100uL。

    h．在1h內(nèi)將酶聯(lián)板放于酶標(biāo)儀內(nèi)，于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。

    （4）計(jì)算  用數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并得出試料中克倫特羅的含量。

    （5）靈敏度和回收率

    本方法的平均檢測(cè)下限為o，ibg／k8。

    本方法在1Ps／kg添加濃度水平上豬尿回收率范圍為60％一120％，豬肝回收率范圍為40％～120％。