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    （1）試劑和材料  以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純試劑，水為符合GB／T6682規(guī)定的二級水。

    ①環(huán)丙沙星  含環(huán)丙沙星不得少于99．0％

    ②恩諾沙星  含環(huán)丙沙星不得少于99．0％

    ③乙腈：色譜純

    ④三乙胺

    ⑤氫氧化鈉

    ⑥磷酸二氫鉀

    ⑦磷酸

    ⑧5．0mot兒氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉飽和溶液14ml，加水稀釋到100ml；

    ⑨0．03mot／L氫氧化鈉溶液：取5．0mol／L氫氧化鈉溶液o．6ml，加水稀釋到100ml。

    ⑩0．05mol／L磷酸／三乙胺溶液（pH 2．4）：取85％的磷酸3．4ml，加水稀釋到1000ml，攪拌下滴加三乙胺，調(diào)pH值至2．4。

    ⑾磷酸鹽緩沖液（用于肌肉、脂肪組織）：取磷酸氫鉀6，88，加水溶解并稀釋至500ral，用lOmol兒氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至7.0。

    ⑿磷酸鹽緩沖液（用于肝臟、腎臟組織）：取磷酸氫鉀&8g，加水溶解并稀釋至600ml，調(diào)pH值為4．0～5．O。

    ⒀環(huán)丙沙星、恩諾沙星標準貯備液：稱取環(huán)丙沙星、恩諾沙星對照晶各50mg，用o．03mol／L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋成濃度為lmg／mI的貯備液，置2～8℃冰箱中保存，有效期為1個月。

    ⒁環(huán)丙沙星、恩諾沙星標準工作液：準確量取適量環(huán)丙沙星、恩諾沙星標準貯備液，用乙腈稀釋成適宜濃度的環(huán)丙沙星、恩諾沙星標準工作液。

    （2）儀器和設(shè)備

    ①液相色譜儀（配熒光檢測器）

    ②分析天平  感量0．0001g

    ③天平  感量O．01g

    ④渦旋振蕩混合器

    ⑤組織勻漿器

    ⑥離心管  25m1、

    ⑦固相萃取裝置

    ⑧離心機

    ⑨C18固相萃取柱

    （3）測定步驟

    ①提取  稱取（2i 0．05）z試料，置于30ml勻漿杯中，加磷酸鹽緩沖液10．0ml，1]0000r／min勻漿llnin。勻漿液轉(zhuǎn)入50ml離心管中，振蕩混合5min，4000r／min離心10rain，上清液轉(zhuǎn)入另一25ml離心管中。用磷酸鹽緩沖液10．0mi洗刀頭及勻漿杯，轉(zhuǎn)入50ml離心管洗殘渣，攪勻，振蕩，離心。合并上清液于25ml離心管中，備用。

    ②凈化  Cis固相萃取柱依次用2ml甲醇、2ml潤洗，潤洗完畢后，準確量取適量備用液過柱，用2ml水洗，擠干。加2．0ml流動相洗脫，擠干。收集洗脫液作為試樣溶液，供液相色譜分析。

    ③標準曲線的制備  準確量取適量環(huán)丙沙星、恩諾沙星標準工作液，用流動相稀釋成濃度為0．002ug／ml，0．005ug／m1，0．01ug／ml，0．05ug／m1，0．10ug／m1，O．30ug／ml，0.50ug／ml的環(huán)丙沙星、恩諾沙星標準溶液，供液相色譜分析。

    ④測定

    a.色譜條件

色譜柱：C18 250mm×4．6mm（內(nèi)徑），粒徑5／tm，或相當(dāng)者。

流動相：0．05mol／L磷酸溶液／三乙胺—乙腈（82+18）

    流速：0．8mi／mid。

    檢測波長：激發(fā)波長280nm；發(fā)射波長450nm

    進樣量：20uL。

    b.測定  取適量試樣溶液和相應(yīng)的標準工作溶液，作單點校準或多點校準，以色譜峰面積積分值定量。標準工作液及式樣液中的環(huán)丙沙星、恩諾沙星響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。在上述色譜條件下，環(huán)丙沙星、恩諾沙星的保留時間分別在11min和8min左右。

    ⑤空白試驗  取空白試料，采用*相同的測定步驟進行平行操作

    （5）靈敏度和回收率

本方法在雞的肌肉、脂肪、肝臟和腎臟組織中的檢測限為環(huán)丙沙星20ug／kg、恩諾沙星在5～20ug／kg

在2～20ug/kg添加濃度水平上，回收率范圍為79．27％～98．74％。