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膠體
閱讀:334 發布時間:2010-11-23電泳的高解析力使其成為生化技術中zui有效力的一門分析利器,以下簡略說明各種電泳的形式及其應用。
a. 不連續膠體電泳 (disc-PAGE) 是以原態蛋白質進行電泳,一般用作純度檢定或活性分析,SDS-膠體電泳 (SDS-PAGE) 則用為次體分子量的測定,梯度(gradient) 電泳則可輔助原態蛋白質分子量的決定。 結合SDS及梯度兩種特性的SDS-梯度膠體電泳,其解析力zui高。
b. 電泳形式 早期使用圓柱狀,演變成直立式的平板膠片 (16×18 cm),zui后改成迷你電泳膠片 (8×10 cm),電泳時間只約一小時,而其解析力不變。現在柱狀電泳只用在等電焦集法,以進行二次元電泳;而大型平板電泳則多用在制備式電泳,一般電泳大多以迷你膠片進行的。
c. 材質 的種類很多,但用在蛋白質者則以聚丙烯酰胺 (polyacrylamide) 為主;聚丙烯酰胺電泳是蛋白質應用zui廣的電泳分析方式。也有少數使用洋菜 (agarose gel),多用在測定pI較廣的異構酶酶群。
d. 泳動率: 在pH 8.8 的電泳條件下,大部分pI 小于8.8 的分子均能往正極泳動;蛋白質的泳動率與所帶電荷成正比,而與其分子量成反比;若分子量一樣,但形狀越不規則,或體積越松散者,泳動率越小。
e. 聚丙烯酰胺電泳 雖然分有原態的disc-及變性的SDS-PAGE 兩種,但兩者除了SDS-PAGE 在整個系統含有0.1% SDS 的外,其余*相同,且其鑄膠及電泳方法均屬大同小異。
f. 原態disc-PAGE 中的樣本蛋白質,因電泳系統中不含界面活性劑SDS,其活性多能保持,可以在上做活性染色。 若目標酶沒有方便的活性染色法,則可把一片一片切下,做每一片的活性測定。