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使用PAP法應注意的問題
閱讀:1108 發布時間:2010-11-231.假陰性及其處理
應用PAP法顯示抗原含量較多的組織或冰凍切片抗原保存良好的標本時,可導致陰性結果。Bigbee(1977)的研究證實,陰性結果是由于*抗體用量過高,與組織抗原結合過多,使相鄰兩個抗體的Fc段間的距離恰好是連接抗體的兩個Fab段結合的長度,于是連接抗體不存在游離Fab段,僅存無活性的Fc段,所以不能將PAP復合物連接在與組織抗原結合的*抗體上,導致陰性結果。尤其是冰凍切,而石蠟切片很少發生這種現象。克服的辦法是將*抗體盡量稀釋。
2.橋抗體
也稱連接抗體。它的兩個Fab段具有相同的結構、性質及與抗原結合的能力,因此,當*抗體和PAP復合中抗HRP抗體來自同一種屬動物時,橋抗體能同時與上述二種抗體結合,起到橋的作用。為了確保橋抗體的二個Fab段之一與*抗體結合,另一個與抗HRP抗體結合,橋抗體的濃度必須高于常規用的第二抗體。
3.PAP復合物
在PAP法和酶橋法中,特別強調*抗體和抗HRP必須來自同一種屬,橋抗體才能發揮橋的作用,將其連接在一起。