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陰離子交換色譜柱洗脫液的選擇

閱讀：8981 發(fā)布時間：2018-5-30

　　陰離子交換色譜柱洗脫液的選擇

　　離子交換色譜柱通常粗短，直徑和長度比一般為1：10～1：50。

　　陰離子交換色譜柱裝柱：

　　1、色譜柱安裝要垂直。

　　2、裝柱時要均勻平整，不能有氣泡。

　　五、平衡緩沖液的選擇：

　　平衡緩沖液是指裝柱后和上樣后用于平衡離子交換色譜柱的緩沖液。

　　平衡緩沖液的離子強(qiáng)度和pH值要保證各個待分離物質(zhì)的穩(wěn)定，要使各個待分離物質(zhì)與離子交換劑有適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合，并盡量使待分離物質(zhì)和雜質(zhì)與離子交換劑的結(jié)合有較大的差別。

　　陰離子交換色譜柱上樣：

　　上樣方式有正上柱和反上柱。

　　上樣時注意樣品液的離子強(qiáng)度和pH值，上樣量應(yīng)小于工作交換量。

　　陰離子交換色譜柱洗脫：

　　1、洗脫液的選擇：

　　（1）保證所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都是穩(wěn)定的。

　　（2）要使結(jié)合在離子交換劑上的所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都能夠被洗脫。

　　（3）梯度范圍盡量小一些，以提高分辨率。

　　2、洗脫方式：

　　離子交換色譜一般采用梯度洗脫，通常有改變離子強(qiáng)度和改變pH值兩種洗脫方式。

　　（1）改變離子強(qiáng)度的洗脫：

　　在洗脫過程中逐步增大離子強(qiáng)度，從而使與離子交換劑結(jié)合的各個組分被洗脫下來。

　　（2）改變pH值的洗脫：

　　陽離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫，陰離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫。

　　由于pH值可能對蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響，一般采用改變離子強(qiáng)度進(jìn)行洗脫。