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IPTG配制的方法及使用說明

閱讀:9014      發布時間:2016-4-26
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IPTG是一種作用*的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用。IPTG溶液的配制很簡單:在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后,用蒸餾水定容10ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。

IPTG的使用方法:

先把IPTG配制成24mg/ml(100mM)的水溶液,并進行過濾除菌后保存。然后在100ml的瓊脂培養基中,加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal(20?mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100μl的Amp(100mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養基。當DNA片段插入pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體),然后轉化lacZ缺失細胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養基,可根據長出菌體的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。

選用IPTG作誘導物的原因

能誘導酶的合成,但又不被分解的分子,稱為安慰誘導物(gratuitousinducer)。?由于乳糖雖可誘導酶的合成,但又隨之分解,產生很多復雜的動力學問題,因此人們常用安慰誘導物來進行各種實驗。X-gal(5-溴-4-錄-3-吲哚-β-半乳糖苷)也是一種人工化學合成的半乳糖苷,可被β-半乳糖苷酶水解產生蘭色化合物,因此可以用作β-半乳糖苷酶活性的指示劑。IPTG和X-gal都被廣泛應用在分子生物學和基因工程的工作中。

某些誘導物與自然的β-半乳糖苷酶相似,且不能?被酶分解,比如異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,(isopropylthiogalactoside,IPTG)。不被細菌分不被細菌分解性質穩定,解性質穩定,它的濃度在實驗中不會改變。復雜的動力學問題,便于研究。IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被運送。半乳糖苷鍵中用硫代替了氧,失去了水解活性,半乳糖苷鍵中用硫代替了氧失去了水解活性,但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物與酶位點的親和力相同,雖不為β-半乳糖苷酶所識的親和力相同,IPTG雖不為半乳糖苷酶所識雖不為但它是lac基因簇十分有效的誘導物

基因簇十分有效的誘導物。但它是基因簇十分有效的誘導物。

IPTG是β–半乳糖苷酶的活性誘導物質。基于這個特性,當pUC系列的載體DNA(或其他帶有lacZ 基因載體DNA)以lacZ 缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體的載體DNA進行轉染時。

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