目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>輔酶Ⅰ系列>> BC5060-50T/48S酮體含量檢測試劑盒 輔酶
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/48S |
| 貨號 | BC5060 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合 |
| 主要用途 | 酮體含量檢測 |
酮體含量檢測試劑盒（血清、血漿、尿液等）說明書
紫外分光光度法
貨號：BC5060
規格：50T/48S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
試劑一A液 | 液體55mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一B液 | 液體55mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二A液 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑二B液 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑三 | 粉劑×3支 | -20℃保存 |
標準品1 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
標準品2 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二A液：臨用前取一支加入1.2mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復凍融；
2、 試劑二B液：臨用前取一支加入600μL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復凍融；
3、 試劑三：臨用前取一支加入400μL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存，可以保存3周。避免反復凍融；
4、 標準品1：8mg 3-羥基丁酸鈉。臨用前加入0.98mL蒸餾水，充分溶解，即8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標準溶液，2-8℃可以保存4周。臨用前根據試驗所需量用蒸餾水稀釋成0.2mg/mL標準溶液待用，即為標準溶液1；
5、 標準品2：8mg乙酰乙酸鋰。臨用前加入0.95mL蒸餾水，充分溶解，即8mg/mL乙酰乙酸鋰標準溶液，-20℃可以保存4周。臨用前根據試驗所需量用蒸餾水稀釋成0.05mg/mL標準溶液待用，即標準溶液2；
6、 BOH工作液配制：臨用前根據試驗所需量將試劑一A液、試劑二A液 、試劑三按照850μL:40μL:10μL（共900μL，1T的量）的比例配成工作液，充分混勻，置于37℃保溫15min（此步驟不可省略），現用現配，工作液在4h內用完；
7、 AcAc工作液配制：臨用前根據試驗所需量將試劑一B液、試劑二B液、試劑三按照870μL:20μL:10μL（共900μL，1T的量）的比例配成工作液，充分混勻，置于37℃保溫15min（此步驟不可省略），現用現配，工作液在4h內用完。
產品說明：
酮體是肝臟脂肪酸氧化分解的中間產物乙酰乙酸（AcAc）、β-羥丁酸（BOH）及丙 酮三者統稱。酮體中丙 酮的生成量相當小，生成后即被吸收。乙酰乙酸和β-羥丁酸則經血流進入肝外組織，在此被氧化，經檸檬酸循環提供更多能量給那些組織使用，例如骨、心肌和腎皮質。
在pH 7.0和37℃條件下，BOH在β-羥丁酸脫氫酶（HBDH）催化下脫氫生成乙酞乙酸，同時NAD+被還原成NADH；在pH 8.8和37℃條件下，AcAc被HBDH還原為3-羥基丁酸酯或脫羧生成丙 酮，同時NADH被氧化成NAD+，NADH在340nm波長下有特征吸收峰，通過檢測在340nm波長下的吸光值變化可以計算出BOH和AcAc的含量，從而計算出樣本中酮體的含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機、可調式移液器、水浴鍋/恒溫培養箱、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
血清（漿）、尿液等液體樣本：直接測定。（若有渾濁可以離心取上清后測定）
二、測定步驟
1、 紫外分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm，用蒸餾水調零。
2、 BOH含量測定：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 100 | ||
標準溶液1 | 100 | ||
蒸餾水 | 100 | ||
BOH工作液 | 900 | 900 | 900 |
將上述溶液依次加入適1mL石英比色皿中，充分混勻20s，記錄340nm處20s時吸光值ABOH樣本1、ABOH標準1、ABOH空白1，37℃水浴鍋或者培養箱反應5min，反應后拿出迅速擦干測定5min20s時吸光值ABOH樣本2、ABOH標準2、ABOH空白2。計算ΔABOH樣本=ABOH樣本2-ABOH樣本1，ΔABOH標準=ABOH標準2-ABOH標準1，ΔABOH空白=ABOH空白2-ABOH空白1。 空白管和標準管只需做1-2次。 | |||
3、 AcAc含量測定：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 100 | ||
標準溶液2 | 100 | ||
蒸餾水 | 100 | ||
AcAc工作液 | 900 | 900 | 900 |
將上述溶液依次加入1mL石英比色皿中，充分混勻20s，記錄340nm處20s時吸光值AAcAc樣本1、AAcAc標準1、AAcAc空白1，37℃水浴鍋或者培養箱反應5min，反應后拿出迅速擦干測定5min20s時吸光值AAcAc樣本2、AAcAc標準2、AAcAc空白2。計算ΔAAcAc樣本=AAcAc樣本1-AAcAc樣本2，ΔAAcAc標準=AAcAc標準1-AAcAc標準2，ΔAAcAc空白=AAcAc空白1-AAcAc空白2。 空白管和標準管只需做1-2次。 | |||
三、酮體含量計算
1、 BOH計算公式
BOH含量（μmol/mL）=(ΔABOH樣本-ΔABOH空白)÷(ΔABOH標準-ΔABOH空白)×CBOH÷126.09×1000
=1.586×(ΔABOH樣本-ΔABOH空白)÷(ΔABOH標準-ΔABOH空白)
2、 AcAc計算公式
AcAc含量（μmol/mL）=(ΔAAcAc樣本-ΔAAcAc空白)÷(ΔAAcAc標準-ΔAAcAc空白)×CAcAc÷108.02×1000
=0.463×(ΔAAcAc樣本-ΔAAcAc空白)÷(ΔAAcAc標準-ΔAAcAc空白)
3、 酮體計算公式
酮體含量（μmol/mL）= BOH含量+ AcAc含量
CBOH：BOH標準溶液1濃度，0.2mg/mL；CAcAc：AcAc標準溶液2濃度，0.05mg/mL；126.09：3-羥基丁酸鈉的分子量，126.09mg/mmol；108.02：乙酰乙酸鋰的分子量，108.02mg/mmol；1000：單位換算系數，1mmol= 1000μmol。
注意事項：
1. 如果測定初始吸光值＞1.5或ΔA＞0.2，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再測定。計算公式中乘上稀釋倍數；
2. 如果ΔA接近空白值，建議加大樣本量，同時保證反應體系總體積不變，相應減少工作液加樣量后測定。例如，若增大樣本量為200μL，則工作液調整為800μL。標準管與樣本管加樣體系應保持一致，計算公式不變。
實驗實例：
取100μL牛血清按上述步驟進行實驗，用1mL石英比色皿測定后進行計算ΔABOH樣本=ABOH樣本2-ABOH樣本1= 0.095-0.056=0.039，ΔABOH標準=ABOH標準2-ABOH標準1=0.175-0.024=0.151，ΔABOH空白=ABOH空白2-ABOH空白1= 0.008-0.005=0.003，ΔAAcAc樣本=AAcAc樣本1-AAcAc樣本2=0.639-0.634=0.005，ΔAAcAc標準=AAcAc標準1-AAcAc標準2= 0.586-0.447=0.139，ΔAAcAc空白=AAcAc空白1-AAcAc空白2=0.696-0.695=0.001。計算
BOH含量（μmol/mL）=1.586×(ΔABOH樣本-ΔABOH空白)÷(ΔABOH標準-ΔABOH空白)=0.369μmol/mL
AcAc含量（μmol/mL）=0.463×(ΔAAcAc樣本-ΔAAcAc空白)÷(ΔAAcAc標準-ΔAAcAc空白)=0.0134μmol/mL
酮體含量（μmol/mL）= BOH含量+ AcAc含量=0.383μmol/mL。
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