谷氨酸合成酶(GOGAT)活性檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品名稱:：  谷氨酸合成酶(GOGAT)活性檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名:   Micro Glutamate Synthase（GOGAT）Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0075      產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣        產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：1710
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:  谷氨酸合成酶檢測試劑盒|GOGAT檢測試劑盒|谷氨酸合成酶|試劑盒

簡要介紹：
GOGAT分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán)，參與氨同化的調(diào)控。
    GOGAT催化谷氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸，形成兩分子的谷氨酸；同時NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100ml×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體20ml×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；
產(chǎn)品說明：
GOGAT分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán)，參與氨同化的調(diào)控。
GOGAT催化谷氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸，形成兩分子的谷氨酸；同時NADH氧化生成NAD⁺，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取：   
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。  
二、測定步驟：
分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長340nm，蒸餾水調(diào)零。

1. 樣本測定

（1）在試劑二中加入18mL試劑一充分溶解混勻，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；現(xiàn)配現(xiàn)用。
（2）在微量石英比色皿/96孔板中加入20µL樣本和180µL試劑二，混勻，立即記錄340 nm處20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。
GOGAT活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GOGAT（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GOGAT（nmol/min/10⁴ cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.642×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10^-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GOGAT（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GOGAT（nmol/min/10⁴ cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.072×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10^-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.6cm；V樣：加入樣本體積，0.02 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。

相關(guān)文獻：
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
《Ammonium Nitrogen Tolerant Chlorella Strain Screening and Its Damaging Effects on Photosynthesis》 作者:Jie Wang, Wei Zhou,Hui Chen,Jiao Zhan, Chenliu He,and Qiang Wang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:30666245
《Altered gut microbiota and mucosal immunity in patients with schizophrenia.》 作者:Ruihuan Xua,Bingbing Wu,Jingwen Liang,Fusheng He,Wen Gu,Kang Li,Yi Luo,Jianxia Chen,Yongbo Gao,Ze Wu,Yongqiang Wang,Wenhao Zhou,Mingbang Wang 期刊:Brain Behav. Immun. 影響因子:6.17 PMID:31255682

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