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苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性檢測試劑盒說明書 微量法
注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
貨號：BC0215
規格：100T/96S
產品內容：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入 4mL 雙蒸水充分溶解待用，可 4℃保存一周。 試劑三：液體 1mL×1 瓶，4℃保存。
苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性生化檢測試劑盒
產品說明：
PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數微生物中，是植物體內苯丙烷類代謝的關鍵酶和 限速酶，在動物體內尚未發現。與一些重要的次生物質如木質素、類黃酮類植保素、黃酮類色素等 合成密切相關，在植物正常生長發育、抗病、抗逆反應中起重要作用。 PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 處有大吸收值，通過測 定吸光值升高速率計算 PAL 活性。
所需的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、 研缽、冰和蒸餾水。
苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性生化檢測試劑盒
操作步驟：
一、粗酶液提取 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上 待測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長 290nm，蒸餾水調零。
在 EP 管或 96 孔板中按順序加入下列試劑
混勻，靜置 10min 后，290nm 處記錄測定管吸光值 A1 和對照管吸光值 A2，△A=A1-A2。 注意：對照管只要做一管
PAL 活性計算
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1） 按蛋白濃度計算 單位的定義：每 mg 組織蛋白在該反應體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.1 定義為一個酶活性 單位。 PAL（U/mg prot）=ΔA×V 樣總÷V 樣÷0.1÷T÷Cpr =66.7×ΔA÷Cpr
用 96 孔板測定的計算公式如下
（1） 按蛋白濃度計算 單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.05 定義為一個酶活性單 位。 PAL（U/mg prot）=ΔA×V 樣總÷V 樣÷0.05÷T÷Cpr =133.4×ΔA÷Cpr
（2） 按按樣本鮮重計算 單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.05 定義為一個酶活性單位。 PAL（U/g 鮮重）＝ΔA×V 樣總÷V 樣÷0.05÷T÷W =133.4×ΔA÷W V 樣：加入樣本體積，5µL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本 蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量。
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