產品名稱:：ATP含量測試盒

產品英文名：ATP Content Assay Kit

產品貨號：BC0300            產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：100管/48樣                      產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：1400
庫存狀態：現貨                          
關鍵字：ATP含量測試盒|ATP檢測試劑盒|試劑盒|

簡要介紹：
ATP 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細胞能量代謝狀態的主要參數。
    測定ATP 含量并且計算能荷，能夠反映能量代謝狀態。肌酸激酶催化肌酸和ATP 反應生成磷酸肌酸，可在700nm 下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸含量，以此反應ATP 含量。

產品詳細描述
產品內容：

產品說明：
     三磷酸腺苷（adenosine 5'-triphosphate，ATP）是生物體內能量轉換基本的載體, 其含量的變化直接關系到各器官的能量代謝。ATP作為重要的能量分子在細胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP水平的改變，會影響許多細胞的功能。通常細胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態下，ATP水平會下降，而高葡萄糖刺激等對于一些細胞可以上調細胞內ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降，在細胞凋亡時ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時發生狀態。ATP含量測定試劑盒可以用于檢測紅細胞或組織內的ATP水平。
自備儀器和用品：
分光光度計、水浴鍋、可調式移液槍、臺式離心機、研缽和蒸餾水。
操作步驟：

• 樣本前處理：
• 紅細胞：抗凝全血取下層積壓紅細胞，一般按1:4的體積比加雙蒸水進行稀釋，再混勻使溶血*，制備成溶血液。將制好的溶血液加入玻璃試管中沸水加熱煮10分鐘，取出混勻抽提1分鐘，4000轉/分鐘，離心10分鐘，取上清液待測。
• 組織樣本：準確稱取組織重，按質量（g）：體積(mL)為1：9的比例加入9倍體積的沸雙蒸水，制成10%的勻漿液，再置于沸水中煮10min，取出混勻抽提1min，3500轉/分鐘，離心10min，取上清液待測。
• 培養細胞：先離心處理將細胞和培養上清分離，棄上清，得到下層沉淀細胞（一般細胞數量達到10⁶ 個），將收集好的細胞加入300-500μL的熱雙蒸水，置于熱水浴（90-100℃）中勻漿破碎后，將細胞懸液于沸水浴中加熱10min，取出混勻抽提1min（渦旋混勻），即可用于測定。（如果存在大塊細胞碎片，需離心后取上清測定）

二、操作步驟

混勻，室溫靜置5min，波長636nm，光徑0.5cm，雙蒸水調零，測定各管吸光值。
注意：在比色前比色皿用自來水洗10次，再用蒸餾水洗4-5次，以免磷污染。
如果樣本量大，建議將試劑混合后再按照該表操作
1混合試劑配制：
工作液A：按試劑一：試劑二：試劑三=100:200:30的比例配制，現用現配，按需配制。
工作液B：按試劑一：試劑二=100:200的比例配制，現用現配，按需配制。
2、試劑配好后按下表操作：

混勻，室溫靜置5min，波長636nm，光徑0.5cm，雙蒸水調零，測定各管吸光值。
注意：在比色前比色皿用自來水洗10次，再用蒸餾水洗4-5次，以免磷污染。
ATP 含量計算：

1. 紅細胞中ATP 含量計算

ATP 含量(μmol/gHb)=[ (A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白)] ×標準品濃度（1×10³μmol/L）×樣本測定前稀釋倍數÷血紅蛋白濃度（gHb/L ) 

1. 組織、細胞中ATP 含量計算
2. ATP 含量(μmol/gprot)=[ (A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白)] ×標準品濃度（1×10³μmol/L）×樣本測定前稀釋倍數÷待測樣本蛋白濃度（gprot/L ) 

注意：
1.要求不能有任何磷污染，建議用一次性塑料試管。
2.顯色應用液配好后，不可放置太久，一般可保存5天，現配現用。
3.組織勻漿宜用2%-5%濃度的勻漿上清，若樣本濃度過高，則底色過深（對照管OD過高），需稀釋測定，一般通過預實驗將對照OD值控制在1.0以下。