Taq DNA Polymerase說明書

貨號：K0680

保存條件：-20℃保存。

組分說明

         Cat. No.                       K0680     K0680E      K0680F

         Kit Size                        500 U      6×500 U     5×2000 U

         Taq DNA Polymerase,  5 U/μl     100 μl     6×100 μl    5×400 μl

         10×Taq PCR Buffer with  Mg2+    2×1 ml      3×5 ml      8×5 ml

                 注意：本產品的10×Taq PCR Buffer中含有15 mM鎂離子。

產品簡介

　　Taq DNA  Polymerase是通過大腸桿菌表達純化的重組酶。其基因來源于Thermus

aquaticus polymerase。該蛋白分子量為94 kDa，具有5′→3′ DNA聚合酶活性和5′→3′外切核酸酶活性，無3′→5′外切核酸酶活性，擴增得到的PCR產物3′端附有一個“A"堿基，因此可直接用于 T/A克隆。本產品具有延伸速度快、擴增效率高的特點，主要適用于PCR法擴增DNA片段、DNA序列測定等實驗。

活性定義

　　用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在74℃，30分鐘內，將10 nmol脫氧

核苷酸摻入到酸性不溶物質所需的酶量定義為1個活性單位（U）。

質量控制

　經過多次柱純化， SDS-PAGE檢測其純度大于99%；經檢測無外源核酸酶活性；

PCR方法檢測無宿主殘余DNA；能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因；室溫存放一

個月，無明顯活性改變。

                本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途

     使用方法

     以下舉例為常規PCR反應體系和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的

     片段大小不同進行相應的改進和優化。

     1. PCR反應體系

 試劑                       50 μl體系              終濃度

10×Taq PCR Buffer with Mg²⁺          5 μl             1×

dNTP Mix，2.5 mM each                    4 μl        200 μM each

Forward Primer，10 μM                    2 μl           0.4 μM

Reverse Primer，10 μM                    2 μl           0.4 μM

Template DNA                           <1 μg       <1 μg/reaction

Taq DNA Polymerase，5 U/μl              0.25 μl

RNase-Free Water                     up to 50 μl

        注意：1）引物濃度請以終濃度0.1-1.0 μM作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優化反應體系。

        2）鎂離子濃度請以終濃度1.5-3 mM作為設定范圍的參考。本產品的10×PCR Buffer中已經含有15 mM鎂離子，可根據不同的引物對和模板來調節鎂離子濃度，由此優化反應體系。

2. PCR反應條件

步驟                    溫度                 時間

預變性                    94℃                2 min

變性                    94℃                30 s

退火                 55-65℃               30 s       25-35個循環

延伸                    72℃                30 s

終延伸                    72℃                2 min

注意：1）一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優化反應條件。

2）延伸時間應根據所擴增片段大小設定，本產品Taq DNA Polymerase的擴增效率為1 kb/30 s。

3）可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以在保證產物得率的前提下應盡量減少循環次數。

3.結果檢測：反應結束后取5  µl反應產物，加入適量上樣緩沖液后，進行瓊脂糖凝膠電

       泳檢測。

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