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色譜柱使用的一般注意事項(xiàng)
1. 色譜柱各部分名稱
2. 色譜柱的安裝
(1) 安裝色譜柱前請(qǐng)先將設(shè)備中的流路充分洗凈，置換成流動(dòng)相。另外，請(qǐng)切換閥清洗并置換進(jìn)樣器的流路（進(jìn)樣環(huán)）。置換不互溶或溶解性低的溶劑時(shí)，先使置換為雙方溶劑都能互溶的溶劑，再置換成使用溶劑。
（例1）從氯仿置換成水的時(shí)候，先置換為甲醇，再置換成水。
（例2）從高濃度緩沖溶液（或鹽的水溶液）置換成水/乙腈的時(shí)候，先置換為水，再置換成水/乙腈。
| 注意 | 色譜柱不能使用的溶劑在流路中殘留可能會(huì)造成色譜柱的劣化。 |
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| 注意 | 流動(dòng)相組成發(fā)生顯著變化，可能造成泵、管路中的污垢脫落，可能會(huì)造成色譜柱的劣化。 |
(3) 請(qǐng)一邊按住管路一邊擰緊色譜柱的末端接頭，防止管路和末端接頭中產(chǎn)生空隙。空隙會(huì)造成樣品的擴(kuò)散，導(dǎo)致色譜峰變寬。
(4) 將流速設(shè)置為小于正常流速的一半，然后開始送液。 在升溫使用色譜柱時(shí)，以低流送液直到達(dá)到設(shè)定溫度，然后逐漸將流速增加到所需流速。
| 警告 | 請(qǐng)檢查溶劑是否泄露。否則可能會(huì)造成漏電、腐蝕或化學(xué)損壞。 |
| 注意 | 色譜柱連接入設(shè)備時(shí)，請(qǐng)注意不要使氣泡進(jìn)入色譜柱，否則可能造成色譜柱劣化。 |
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| 注意 | 當(dāng)連接色譜柱或從停止送液的狀態(tài)開始送液時(shí)，以小于正常流速一半的流速送液，壓力突然升高可能會(huì)使色譜柱劣化。 |
| 注意 | 升溫使用色譜柱后，將流速降低至正常流速的一半以下并繼續(xù)送液，柱溫恢復(fù)至室溫，然后停泵。 否則洗脫液冷卻時(shí)發(fā)生收縮，在色譜柱內(nèi)形成空隙可能導(dǎo)致色譜柱劣化。 |
3. 樣品配制
(1) 盡量使用流動(dòng)相溶解和稀釋樣品。 如果難以溶解在流動(dòng)相中，請(qǐng)盡量和流動(dòng)相組成接近。 對(duì)于梯度洗脫，建議使用初始流動(dòng)相配制樣品。
(2) 為了防止由于顆粒物（不溶物）的堵塞導(dǎo)致色譜柱變差，劣化或性能變差，請(qǐng)使用濾膜（0.45μm）過(guò)濾樣品。
(3) 為了保護(hù)分析柱，建議使用保護(hù)柱。
| 參考 | 保護(hù)柱可保持分析柱的性能，并沒有提高分離性能的作用。 |
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4. 流動(dòng)相配制
(1) 流動(dòng)相請(qǐng)充分脫氣防止有氣泡。
(2) 流動(dòng)相中含有不溶的雜質(zhì)可能會(huì)導(dǎo)致色譜柱性能下降和色譜圖噪聲，因此請(qǐng)使用濾膜（0.45μm）過(guò)濾流動(dòng)相。
(3) 確認(rèn)色譜柱的儲(chǔ)存溶劑，置換不互溶或溶解性低的溶劑時(shí)，先置換成雙方溶劑都能互溶的溶劑，再置換成使用溶劑。
(4) 置換流動(dòng)相時(shí)，請(qǐng)使用通常流速一半以下的流速送液。
(5) 進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于流動(dòng)相組成的變化，色譜柱壓力可能會(huì)超過(guò)梯度洗脫過(guò)程中的最大使用壓力。 請(qǐng)調(diào)整流速和色譜柱溫度，以免超出最大使用壓力。
| 注意 | 使用水時(shí)，請(qǐng)使用超純水裝置新配制的水或者剛開封的HPLC級(jí)蒸餾水。使用有機(jī)溶劑時(shí)，請(qǐng)使用HPLC級(jí)以上的試劑，開封長(zhǎng)時(shí)間的有機(jī)溶劑可能有性質(zhì)改變、吸濕、污染的問(wèn)題，請(qǐng)不要使用。 |
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| 注意 | 請(qǐng)勿使用已長(zhǎng)時(shí)間保存的流動(dòng)相，組成的變化可能導(dǎo)致洗脫行為的變化和色譜柱的劣化。 |
| 注意 | 如果使用腐蝕性較強(qiáng)的鹽（例如氯化鈉），請(qǐng)?jiān)诜治龊髮⑵湎磧簦悦恹}殘留在設(shè)備或色譜柱上，設(shè)備和色譜柱可能會(huì)生銹。 |
| 參考 | 建議使用在線脫氣機(jī)。 |
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| 參考 | 請(qǐng)?jiān)O(shè)置泵的報(bào)警壓力，以避免超過(guò)最大可用壓力。 |
5. 色譜柱清洗方法
流路或者樣品中有不溶物質(zhì)或者吸附性物質(zhì)殘留在色譜柱內(nèi)，可能會(huì)影響色譜柱的洗脫及壓力的變化，這種情況清洗色譜柱可能有改善效果。使用保護(hù)柱時(shí)，請(qǐng)先去除保護(hù)柱進(jìn)行檢測(cè)，如果效果改善了，則可能是保護(hù)柱的原因，請(qǐng)清洗保護(hù)柱。
如果去除了保護(hù)柱仍然沒有改善，請(qǐng)分別清洗保護(hù)柱和分析柱，請(qǐng)注意把保護(hù)柱和分析柱分開清洗。清洗色譜柱時(shí)，請(qǐng)不要連接檢測(cè)器，流動(dòng)相從色譜柱流出后直接流入廢液缸即可。
(1) 如果不溶物堵在色譜柱入口，可以逆接色譜柱并以小于正常流速一半的流速通流動(dòng)相來(lái)將其除去。
(2) 其他的清洗方法請(qǐng)參考各產(chǎn)品的使用說(shuō)明書。
6. 色譜柱的保存
置換成出廠時(shí)的儲(chǔ)存溶劑，從裝置中卸下色譜柱并擰緊兩端堵頭，在溫度變化小的陰暗處儲(chǔ)存。
| 注意 | 色譜柱內(nèi)絕對(duì)不能干燥，否則可能導(dǎo)致色譜柱劣化。 |
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7. 色譜柱的檢定方法
檢定條件請(qǐng)參考各產(chǎn)品包裝盒中的出廠報(bào)告(Certificate of Analysis)。理論塔板數(shù)(N)和不對(duì)稱系數(shù)(Fas)請(qǐng)通過(guò)如下方法計(jì)算。
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8. 色譜柱的廢棄方法
通常實(shí)驗(yàn)中使用的色譜柱應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)卣囊?guī)定，作為工業(yè)廢棄物進(jìn)行處置。
9. 其它注意事項(xiàng)
(1) 請(qǐng)勿擰開色譜柱的末端螺絲。
(2) 請(qǐng)勿對(duì)色譜柱施加敲擊，掉落等強(qiáng)烈沖擊。