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做電泳實(shí)驗(yàn)常見條帶問題分析詳解

時(shí)間:2023/8/9閱讀:6188
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一、微笑形區(qū)帶(兩邊翹起,中間凹下): 

        形成原因:主要是由凝膠中間部分凝固不均勻引起的,多出現(xiàn)于較厚的凝膠中。

        處理辦法:待其充分凝固再做實(shí)驗(yàn)。

二、皺眉形區(qū)帶(兩邊向下,中間鼓起):

        形成原因:主要出現(xiàn)在蛋白質(zhì)垂直電泳槽中,一般是由兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈引起的。

        處理辦法:可在兩板之間加入適量緩沖液,以排除氣泡。

三、區(qū)帶拖尾:

        形成原因:主要是由樣品溶解效果不佳或分離膠濃度過大引起的。

        處理辦法:加樣前離心;選擇適當(dāng)?shù)臉悠肪彌_液,加適量樣品促溶劑;電泳緩沖液放置時(shí)間過長(zhǎng),重新配制;降低凝膠濃度。

四、區(qū)帶出現(xiàn)紋理:

        形成原因:主要是由樣品不溶性顆粒引起的。

        處理辦法:加樣前離心,加適量樣品促溶劑。

五、鬼帶:

        形成原因:主要是由于還原劑在加熱的過程中被氧化而失去活性,致使原來被解離的蛋白質(zhì)分子重新折疊結(jié)合和亞基重新締合,聚合成大分子,其分子量比目標(biāo)區(qū)帶大,有時(shí)不能進(jìn)入分離膠。但它與目標(biāo)區(qū)帶有相同的免疫學(xué)活性,在免疫印跡反應(yīng)中可見,能與目標(biāo)區(qū)帶對(duì)應(yīng)的抗體作用。

        處理辦法:加熱煮沸后再添加適量的DTT或Beta巰基乙醇,以補(bǔ)充不足的還原劑;加適量EDTA來阻止還原劑的氧化。

六、溴酚藍(lán)不能起到指示作用:

        形成原因:實(shí)驗(yàn)中常遇到溴酚藍(lán)已跑出板底,但蛋白質(zhì)卻還未跑下來的現(xiàn)象,主要與緩沖液和分離膠的濃度有關(guān)。

        處理辦法:更換正確pH值的Buffer,降低分離膠濃度。

七、區(qū)帶很粗:

        形成原因:主要是由于濃縮膠未濃縮好。

        處理辦法:適當(dāng)增加濃縮膠長(zhǎng)度,保證濃縮膠貯液的pH正確(6.8),適當(dāng)降低電壓。

八、電泳電壓很高而電流很低:

        形成原因:主要是由于電泳槽沒有正確裝配,電流未形成通路。

        處理辦法:電泳槽正確裝配。


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