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基因電轉化技術的創新介紹

時間:2021/1/15閱讀:2115
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常規的轉染包括脂質體,電轉化和病毒法。普通的293Hela等細胞系,脂質體轉染也能達到70-80%。而對于其他一些極難轉染的細胞,如原代神經元,原代神經干細胞,免疫細胞等來說,脂質體轉染不僅轉化效率很低(10%),而且細胞死亡率*。因此有些研究人員不得不轉用更加昂貴而且毒性更大的病毒包被法。病毒法可以提高轉化效率,但是在后續培養中,細胞死亡率很高,細胞自然的生理生化特性遭到破壞,無法后續實驗。而電穿孔技術的發展及所具備的強大優勢越來越受到科研人員的重視。

上個世紀80年代一臺電轉化儀誕生至今,大部分電轉化儀的波形仍是單向高壓方波(如下圖),細胞死亡率*。如小鼠精原干細胞這種脆弱的細胞就會全部死亡。

 

為了解決單向高壓方波的問題,出現了需要配備特殊試劑的電轉化儀。它延續了傳統的方波,并設定了固定的參數。為了提高轉化效率,每換一種或幾種細胞,就必須重新購買不同的轉染試劑,導*高的試劑使用成本,多數用戶表示難以接受。而且由于“黑匣子”設計模式,用戶只能知道轉染程序序列號,無法了解具體的轉化參數,更無法優化設定參數!

因此,無需特殊轉染試劑輔助,又能顯著提高轉化效率和存活率的電轉化技術的研發就成為細胞轉染的發展方向。

隨著電傳孔技術質的飛躍,日本BEX公司2012年發布了創新的瞬時穿孔高壓+動態衰減/靜態衰減/恒流+反向方波脈沖組合模式,完*了上述問題。脈沖波形圖如下:

       

 

瞬時高壓可快速在細胞膜表面打孔并減少細胞死亡;隨后切換成幾十伏的低壓來驅動DNA高效進入細胞,反向脈沖可以顯著增加DNA進入細胞的幾率,大幅提高轉化效率。在一年時間,用CUY21 EDIT II 轉化過的細胞超過百種,其中多數都是極難轉染的細胞,包括大鼠胚胎原代神經元細胞、NIH/3T3NG108-15raw264.7SSCHepG-2、N2a、PC3LCLNIT1、小鼠胚胎原代干細胞以及細胞系,和原代小鼠β胰島細胞團、人B細胞系、人淋巴細胞等等,帶給用戶非常驚喜的轉化效果。

如下圖:原代神經元的轉化效果圖

 

針對一些非常脆弱的組織或細胞(如成年鼠腦),需要采用恒定的電流進行穿孔。組合脈沖的恒流轉化模式,是一種可以滿足這種轉化要求的技術。

 

請見下圖,分別用動態衰減脈沖模式,靜態衰減脈沖模式和脂質體轉染方法平行對小鼠胰島瘤β細胞系進行轉染:

由上可見,針對很多細胞, 動態衰減脈沖模式可以比靜態衰減脈沖模式提供更高的轉染效率,同時保證了細胞的存活率,為極難轉染細胞的研究開辟了新的一頁。

 

關于上述組合脈沖技術發明廠家的介紹:

BEX公司誕生于1990年,是專業研發,生產電轉化儀和細胞融合儀的廠家。1998年推出CUY21EDIT活體基因電轉化儀,開創了活體基因轉化的新時代,并樹立了CUY21在活體領域的,已有超過2000臺專業的CUY21系列轉化儀服務于科研工作者,并延續著的優勢,發表在Nature,Cell等雜志的文獻超過了數百篇。

201210月,回顧經典,BEX再次發布具有歷程碑意義的超級多脈沖活體/細胞電轉化儀CUY21 EDIT II。除了傳統的活體轉化優勢,CUY21EDIT II更是在細胞轉染技術上達到了的高度。無需任何特殊試劑即可得到*的轉染效率,尤其是極難轉的細胞系,如原代神經元的轉染效率可達60%甚至更高。這一突破解決了長久以來原代細胞轉染存活率低、轉化效率低下,價格昂貴的問題。因此,許多受益的學者也*改變了他們對電轉化儀的認識。

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