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凱氏定氮儀測定蛋白質有哪幾個步驟呢
凱氏定氮儀是根據凱氏定氮法設計的用于測定化合物或混合物中總氮量的一種儀器。使用前需要校準的項目有空白試驗、回收率的測定、儀器的測量重復性。
凱氏定氮儀樣品消化
濃硫酸具有脫水性和氧化性，可使有機物中的碳、氫被氧化為二氧化碳和水，蛋白質會分化為氨，然后氨與硫酸結合生成硫酸銨。一般參加硫酸鉀和硫酸銅作為催化劑來加速蛋白質分化。硫酸鉀能夠行進溶液的沸點，一般情況下，純硫酸的沸點在340℃左右，可是在添加硫酸鉀后，可行進至400℃以上。行進溫度使有機物加速分化。可是不能參加過多的硫酸鉀，不然會因為溫度過高，使生成的硫酸銨發生熱分化成氨而構成丟掉。硫酸銅除作為催化劑外，還能夠指示消化完畢的抵達，有機物悉數消化后，溶液呈現清澈的藍綠色，硫酸銅還能夠做蒸餾時堿性反響的指示劑。
凱氏定氮儀蒸餾
消化液中的硫酸銨在堿性環境下會轉化成氨。為避免水中微量的氨氣受熱逸出，影響測定效果，所以水蒸氣發生器中的水要堅持酸性。硫酸銨是一種強酸弱堿鹽，需求滿足的堿液使結合態的氨反響并釋放出來，這個進程中的氫氧化鈉一定要過量，過量的氫氧化鈉會與硫酸銅生成藍色的氫氧化銅堆積，氫氧化銅受熱分化成黑色的氧化銅堆積。查驗蒸餾是否結束，可用奈氏試紙法，NH4+或NH3遇奈氏試劑會反響生成棕赤色的銨化合物。
凱氏定氮儀吸收
加熱蒸餾放出的氨可用硼酸溶液吸收，硼酸有吸收氨的效果，又因其呈微小酸性，不影響下一步滴守時指示劑的變色反響。溫度過高會使硼酸吸收液對氨的吸收效果削弱，然后構成丟掉，故一般不逾越40℃。
凱氏定氮儀滴定
待吸收完后，用硫酸或許鹽酸規范溶液進行酸堿滴定，滴定液的濃度直接影響效果的準確性，有必要按照要求進行制作和標定。混合指示劑在中性溶液中呈灰色，滴定完畢時液體呈灰色。