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技術文章

ELISA試劑盒特異性與非特異性著色的區分

閱讀:994          發布時間:2017-1-6

小鼠ELISA試劑盒切片染色后背景太深,如何區分特異性與非特異性著色?
全片著色是指整個切片全都染上了顏色,著色的強度可深可淺,總之,分不清那些組織是陽性那些組織是陰性。出現這種現象的原因有:
1.抗體濃度過高:一抗濃度過高是常見的原因之一。解決辦法是,每次使用新抗體前應當對其工作濃度進行測試,使每一抗體個體化,找到適合自己實驗室的理想工作濃度,既使是即用型的抗體也應如此,不能只簡單的按說明書進行染色。
2.抗體孵育時間過長或溫度較高:解決辦法是,嚴格執行操作規程,隨身佩帶報時表或報時鐘,及時提醒,避免因遺忘而造成時間延長。現在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,要求一抗孵育的時間不是傳統的1小時,而是30分鐘,因此,要根據染色結果進行調整。
3.切片在緩沖液或修復液中浸泡時間太長(大于24小時):原因上不清楚,但現象存在。有的實驗室喜歡前一天將切片脫蠟至修復,第二天加抗體進行免疫組化染色,如果將裝有切片和修復液的容器放在4ºC冰箱隔夜,對結果無明顯影響,如果放在室溫,特別是炎熱的夏天,會出現背景著色,因此,不可存放時間太長。

4.一抗變質、質量差的多克隆抗體:注意抗體的有效期,過期的抗體要麼不顯色要麼背景著色。用新買的抗體時設立陽性對照和用使用過的抗體作比較。
5.DAB變質和顯色時間太長:DAB現用現配,如有沉渣應進行過濾后再用。配制好的DAB不應存放時間太長,因為在沒有酶的情況下,過氧化氫也會游離出氧原子與DAB產生反應而降低DAB的效力,未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節約的辦法是不可取的。DAB的顯色在顯微鏡下監控,達到理想的染色程度時立即終止反應。不過當染色片太多時或用染色機時,這樣做似乎不現實,但至少應對一些新的或少用的抗體顯色時進行監控,避免顯色時間過長。
6.組織變干:修復液溢出后未及時補充液體、染色切片太多、動作太慢、忘記滴液、滴液流失等都是造成組織變干的原因。解決的辦法是操作要認真仔細,采用DAKO筆或PAP Pen在組織周圍畫圈,可以有效的避免液體流失,也能提高操作速度。小鼠ELISA試劑盒
1,3-二氨基-2-羥基丙烷    一氯環戊烷    四十四烷
1-溴二十二烷    二苯基二甲氧基硅烷    (S)-2-氨基辛烷
甲基環己基二甲氧基硅烷    苯硅烷    (R)-2-氨基辛烷
1,3-雙(3-氨基丙基)-1,1,3,3-四甲基二硅氧烷    N-(2-羥乙基)吡咯烷    1,1-二氟乙烷
1,3二氯-1,1,3,3-四異丙基二硅氧烷    1-溴-2-氟乙烷    三氯氟甲烷
十甲基環五硅氧烷    6-溴-1,4-苯并惡烷    3-氨基丙基二甲基甲氧硅烷
2-甲基-4-丙基-1,3-氧硫雜環己烷    2,2-雙(3-氨基-4-羥基苯基)六氟丙烷    N-氨基繞丹寧
2,2-二甲基噻唑烷    1-Boc-3-碘氮雜環丁烷    2,2,4,4-四甲基戊烷
1-溴-2-甲基丁烷    6'-二乙氨基-2'-二芐氨基熒烷    1,1,3,3-四甲基二硅氧烷
四甲基二乙烯基二硅氧烷    1-Boc-3-氨甲基氮雜環丁烷    四甲基二硅氮烷
碘甲基*基硅烷    N-[(4-氨基苯基)-甲基磺酰基]吡咯烷    六甲基乙烷
N-(2-氯乙基)吡咯烷    1,3,5-*基-1,3,5-三(3,3,3-三氟丙基)環三硅噁烷    四(*基硅基)硅烷
小鼠ELISA試劑盒

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