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技術(shù)文章

ELISA試劑盒標(biāo)本如何正確保留

閱讀:399          發(fā)布時間:2017-3-10

小鼠ELISA試劑盒在冰箱中保留過久的標(biāo)本,血清中IgG可聚組成多聚體、AFP可構(gòu)成二聚體,在間接法ELISA測定中會致使本底過深、乃至構(gòu)成假陽性;標(biāo)本放置時刻過長(如一天以上),有時抗原或抗體免疫活性減弱,亦可呈現(xiàn)假陰性。為戰(zhàn)勝上述攪擾,ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮收集;如不能當(dāng)即測定,5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,散布不均,應(yīng)充沛混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不行激烈振動。
ELISA試劑盒因為各種人為原因致使的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞損壞溶解時釋放出很多具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為符號的ELISA測定中,會致使非特異性顯色,ELISA試劑盒攪擾測定成果。為戰(zhàn)勝上述攪擾效果,標(biāo)本收集時有必要留意防止溶血。
標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響
抗凝劑、酶抑制劑及迅速別離血清的別離膠等均對ELISA測定有一定攪擾效果。
標(biāo)本受細(xì)菌污染
因菌體中可能富含內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因而,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而攪擾測定成果。
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的狀況下,正常血液收集后1/2~2h開端凝結(jié),18~24h*凝結(jié)。臨床查驗工作中,有時為了爭取時刻迅速檢測,常在血液還未開端凝結(jié)時即強行離心別離血清,此刻的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在小鼠ELISA試劑盒測定過程中能夠構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊,易構(gòu)成假陽性成果;這類狀況于次日復(fù)查時因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查成果變?yōu)殛幮浴榉乐股鲜鰯嚁_效果,解決的辦法是血液標(biāo)本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清,或標(biāo)本收集時用帶別離膠的采血管或于采血管中參加適當(dāng)?shù)拇倌齽?/span>
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