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大鼠ELISA試劑盒質(zhì)粒提取的原理與常見問題
現(xiàn)在較常用的質(zhì)粒提取方法有三種:堿裂解法、煮沸法和去污劑裂解法，前兩種方法較為劇烈，適用于較小的質(zhì)粒（＜15Kb），而去污劑裂解法則比較溫合，一般用于分子量較大的質(zhì)粒（＞15Kb）。
堿裂解法是一種廣泛使用的制備質(zhì)粒DNA的方法。其原理為：染色體DNA遠遠大于質(zhì)粒DNA，染色體DNA為線狀分子，而質(zhì)粒為共價閉合環(huán)狀分子。當pH 12.0-12.6堿性環(huán)境中，線性的大分子的染色體DNA*變性，而共價閉環(huán)質(zhì)粒DNA在將PH調(diào)至中性后即可以恢復(fù)其天然構(gòu)象，在高鹽濃度存在的條件下，染色體DNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍為可溶狀態(tài)，通過離心可除去大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)，質(zhì)粒DNA仍在上清中。
質(zhì)粒是真核細胞細胞核外或原核生物擬核區(qū)外能夠進行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器（主要指線粒體和葉綠體）中和細菌細胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸分子。現(xiàn)在習慣上用來專指細菌(大腸桿菌）、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質(zhì)粒常被用做基因的載體。質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質(zhì)粒稱為附加體(episome)，這類質(zhì)粒能夠整合進細菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質(zhì)粒在宿主細胞體內(nèi)外都可復(fù)制。(Vector)(DNA)
目前，已發(fā)現(xiàn)有質(zhì)粒的細菌有幾百種，已知的絕大多數(shù)的細菌質(zhì)粒都是共價閉合環(huán)狀DNA分子(簡稱cccDNA)。細菌質(zhì)粒的相對分子質(zhì)量一般較小，約為細菌染色體的0.5%～3%。根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小，大致上可以把質(zhì)粒分成大小兩類：較大一類的相對分子質(zhì)量是40×106以上，較小一類的相對分子質(zhì)量是10×106以下(少數(shù)質(zhì)粒的相對分子質(zhì)量介于兩者之間)。每個細胞中的質(zhì)粒數(shù)主要決定于質(zhì)粒本身的復(fù)制特性。按照復(fù)制性質(zhì)，可以把質(zhì)粒分為兩類：一類是嚴緊型質(zhì)粒，當細胞染色體復(fù)制一次時，質(zhì)粒也復(fù)制一次，每個細胞內(nèi)只有1～2個質(zhì)粒；另一類是松弛型質(zhì)粒，當染色體復(fù)制停止后仍然能繼續(xù)復(fù)制，每一個細胞內(nèi)一般有20個左右質(zhì)粒。這些質(zhì)粒的復(fù)制是在寄主細胞的松弛控制之下的，每個細胞中含有10-200份拷貝，如果用一定的藥物處理抑制寄主蛋白質(zhì)的合成還會使質(zhì)粒拷貝數(shù)增至幾千份。
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