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細胞收到后處理方法
閱讀：648 發布時間：2021-11-24您需要準備好細胞所要用到的培養基和相關試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多,但是不同的實驗室培養條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會導致對細胞處理不當,或者環境的不適應而造成細胞的死亡。
1、收到細胞,第1時間要觀察細胞形態是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細胞密度有疑議及時咨提供細胞的技術人員。由于運輸的時間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿培養基的瓶子里生長的狀態和平時有點不一樣,主要是貼壁牢固問冋題。比如29紅,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的培養基瓶子里面,會發生大片的脫落,細胞聚集在一起,但是細胞生長還是正常的,通過離心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長當通過上一步的觀察,細胞初步沒有任何問題時,進行下一步操作。
2、當收到的細胞密達到8%左右時,則處理如下：
棄除瓶中大部分培養基,僅保皕5到1∽L培養所需的常規培養基;或更換新鮮的培養基,置于培養箱中,隨后毎夭觀察。細胞在低于正常生長溫度情況下,會調整為靜止期,或者慢速生長期,必須恢復37度的環境至少3個小時左右,才能重新調整到接近對數生長期的狀態,在對數生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率,和細胞的存活率。
3、如果經第1步觀察發現細胞密度超過90%,并且細胞狀態很好時,則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據不同的細胞而定。對于生長比較快,狀態穩定,不易受外界景響的細胞可以一次多傳幾瓶;對于生長較慢,細胞比較薄,狀態容易波動的細胞類型,一些,保證每瓶細胞密度大些,便于穩定生長。至于一些比較陌生的細胞,第1次處理也可以照第二種情況