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技術(shù)文章

ELISA試劑盒實驗方法大起底

閱讀:407          發(fā)布時間:2015-3-6

一款合適的分離ELISA試劑盒可以說是實驗成功的保障,因為只有獲得正確的ELISA試劑盒,下游的分析結(jié)果才可能準(zhǔn)確。目前,市面上有多種多樣的分離試劑盒可供選擇,它們的主要區(qū)別在于分離方法和篩選標(biāo)志。那么,如何選擇自己的細胞分離試劑盒呢?希望本文能為你提供一些幫助。
正向選擇VS負向選擇
試劑盒分離試劑盒的工作原理主要有兩種,正向選擇和負向選擇。正向選擇的試劑盒直接結(jié)合的抗體來進行捕獲。這種抗體通常與磁珠相連,可以利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-復(fù)合物提取出來,再通過二抗將磁珠與目標(biāo)分開。負向選擇的試劑盒也采用類似的抗體包被磁珠,不過這種試劑盒是通過去除樣品中的非目的,來間接捕獲目的。
這兩種細胞分離試劑盒如何取舍,主要取決于目標(biāo)細胞的表面是否具有特異性強的篩選標(biāo)志。這樣的篩選標(biāo)志能夠?qū)崿F(xiàn)特異性的捕獲,避免所獲得的細胞被非目標(biāo)細胞污染。如果你的目標(biāo)細胞剛好具有這樣的篩選標(biāo)志,那么正向選擇的ELISA細胞分離試劑盒就是*選擇。但如果目標(biāo)細胞并不具有特異性強的篩選標(biāo)志,那我們還是選用負向選擇的細胞分離試劑盒。
篩選標(biāo)志的確定
通過PubMed等數(shù)據(jù)庫中的文獻,我們一般可以確定在目標(biāo)上表達的篩選標(biāo)志。如果文獻中找不到適合自己的表面標(biāo)志,我們還可以用目標(biāo)的DNA序列進行BLAST搜索。BLAST搜索結(jié)果會顯示,目標(biāo)細胞上可能表達的表面標(biāo)志,在此基礎(chǔ)上可以選取用于捕獲的細胞表面蛋白。舉例來說,對一個T進行BLAST搜索,結(jié)果會顯示該是否表達CD4或CD8。在得知目標(biāo)表達CD4之后,我們可以先對樣品進行一個免疫實驗(如ELISA),以檢驗BLAST搜索的結(jié)果。一旦證實目標(biāo)的確表達CD4,我們就可以用相應(yīng)試劑盒來篩選CD4陽性的T細胞。

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