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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作和標(biāo)本采集及貯存

閱讀:161          發(fā)布時(shí)間:2016-3-30

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作之標(biāo)本采集及貯存
血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測,嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。一般說來,在 5 天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合,使間接法的 試劑 本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會(huì)使 抗體 效價(jià)跌落,所以測 抗體 的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存;使用一次性玻璃試管或真空管采血管;并使用非抗凝標(biāo)本,肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值,可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫有關(guān);EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性;血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?br />嚴(yán)重溶血,以 HRP 為標(biāo)記的ELISA 測定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性; 混有紅細(xì)胞的血清 易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈;如有 細(xì)菌污染 ,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng); 標(biāo)本凝固不全 ,有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測,常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果; 采血試管洗滌不* 、反復(fù)使用易交叉污染; 塑料試管能吸附抗原物質(zhì) ,樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。
所以為了保證我們實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,在標(biāo)本采集和貯存的時(shí)候我們需要保證其不被污染不受到破壞。

CMYA2    心肌病相關(guān)蛋白2
C5orf34     5號(hào)染色體開放閱讀框34抗體
CREG1    E1A激活基因刺激蛋白1抗體
C2orf42    2號(hào)染色體開放閱讀框42抗體
Classical swine fever virus    豬瘟病毒抗體
C3orf54    3號(hào)染色體開放閱讀框54抗體
C2orf43    2號(hào)染色體開放閱讀框43抗體
Classical swine fever virus    豬瘟病毒抗體
CP110    中心體蛋白110抗體
Cellulase    纖維素酶
CDC14B    細(xì)胞分裂周期蛋白14B抗體
C1orf177    1號(hào)染色體開放閱讀框177抗體
C1orf183    1號(hào)染色體開放閱讀框183抗體
Clenbuterol    克侖特羅/瘦肉精抗體
C6orf151    6號(hào)染色體開放閱讀框151抗體
C15orf52    15號(hào)染色體開放閱讀框52抗體
C2orf89    2號(hào)染色體開放閱讀框89抗體

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