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大鼠ELISA試劑盒檢測樣本處理方法

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大鼠ELISA試劑盒檢測樣本處理方法
1、血清
血清是zui常用于elisa檢測的一類樣本,處理也比較簡單。用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。同時必須得注意,在采血的過程中應避免溶血,以及避免細菌污染,以免造成實驗結果的不準確。
2、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
3、尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min,取上清即可檢測。為了保證檢測的準確性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內檢測;4℃保存的樣本應在1周內進行檢測。
4、細胞裂解液
1.吸去培養(yǎng)板內的培養(yǎng)基,用胰酶消化細胞,加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。
2.收集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預冷的pbs潤洗3次。
3.加入適量的預冷pbs或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μl pbs重懸。
4.將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復凍融幾次,使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。
5.4℃ 10000×g 離心10min,除去細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
5、細胞培養(yǎng)上清
取細胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
6、組織勻漿液
1.將組織樣本用pbs (0.01m, ph 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質。
2.將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應盡量小,便于勻漿得更充分
3.將組織按一定的比例加入預冷的pbs(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿比例為組織重量:pbs體積=1:9,勻漿時置于冰上或冰浴中。
4.吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
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