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大鼠表皮干細胞

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5×10^57750元15 瓶 可售
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更新時間:2025-04-09 10:53:01瀏覽次數(shù):348

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產品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
貨號 A01X1657 主要用途 僅供科研研究實驗
組織來源 皮膚組織 種屬來源
生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 鋪路石狀細胞
大鼠表皮干細胞的相關產品:大鼠腸巨噬細胞日本曲霉Aspergillus japonicus大鼠腸黏膜上皮細胞亞灰樹花(大奇果菌)Polyporus giganteus大鼠腸平滑肌細胞德巴利腐霉Pythium debaryanum大鼠腸微血管內皮細胞椒疫霉Phytophthora capsici

詳細介紹

QQ截圖20240123162116.png

一、細胞基本屬性:

細胞名稱

大鼠表皮干細胞

商品貨號

A01X1657

組織來源

皮膚組織

產品規(guī)格

5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

種屬來源

大鼠

傳代特性

根據(jù)細胞特性

生長特性

貼壁

細胞形態(tài)

鋪路石狀細胞

 

細胞簡介

角質形成細胞在基底層有一亞群 ,即表皮干細胞 ,它通過對稱或不對稱分裂產生 短暫擴增細胞 ,短暫擴增細胞經過幾代擴增后便成為終末分化的表皮角質細胞。 表皮是一個可以持續(xù)自我更新的組織 ,  因此表皮干細胞具有足夠的增殖潛力 ,表 皮干細胞不僅在體內平衡和創(chuàng)傷修復中其關鍵作用 ,而且是腫瘤發(fā)生和基因治療 的主要靶標。

包被條件: 

培養(yǎng)基:原代角質形成細胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

傳代比例:

消化液:0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件:氣相:空氣 95%;  CO2 ,  5%

1.jpg

5.jpg



原代細胞實驗步驟:

一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質。

五、大腦皮質放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。

原代細胞使用方法:

是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈鋪路石狀細胞,在技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養(yǎng)基終止消化;

3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

4)待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀;

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min);消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化;

3)經1000rpm,離心5min,丟棄上清,用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內;

4)待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品:
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大鼠肝枯否細胞
大鼠肝內膽管上皮細胞
大鼠肝實質細胞
大鼠肝外膽管上皮細胞
大鼠肝星狀細胞
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大鼠睪丸支持細胞
大鼠骨骼肌成纖維細胞
大鼠骨骼肌細胞
大鼠骨內膜間充質干細胞
大鼠骨髓單核細胞
大鼠骨髓基質細胞
大鼠骨髓間充質干細胞
大鼠骨髓來源巨噬細胞
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點枝頂孢Acremonium strictum
大麗花輪枝孢(棉花黃萎病菌)Verticillium dahliae
尖鐮孢萎蔫專化型(棉花枯萎病菌)Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum
膠孢炭Colletotrichum gloeosporioides
畫眉草彎孢Curvularia eragrostidis
蘆葦凸臍蠕孢Exserohilum phragmatis
三葉草彎孢Curvularia trifolii
嘴突凸臍蠕孢Exserohilum rostratum
塞內加爾彎孢Curvularia senegalensis
大鼠表皮干細胞擬粗壯彎孢Curvularia pseudorobusta
麥根腐平臍蠕孢Bipolaris sorokiniana
穗狀平臍蠕孢Bipolaris spicifera
梨黑斑鏈格孢Alternaria gaisen
粉紅單端孢Trichothecium roseum

 


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