化工儀器網
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 人腎小球系膜細胞 | 商品貨號 | A01X1329 |
組織來源 | 腎組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 可傳3代左右 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
包被條件： PLL(0.1mg/ml)
培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
人腎小球系膜細胞分離自腎小球組織；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構造。血液經由入球小動脈進入腎小球。腎小球內的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內，微血管受到高壓，而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進行。微血管中的血液經由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球系膜是位于腎小球毛細血管袢之間的一種特殊間充質，由系膜細胞和系膜基質組成。腎小球系膜細胞是腎小球內非常活躍的細胞，具有分泌細胞基質、產生細胞因子、吞噬和清除大分子物質及類似平滑肌細胞收縮的功能。腎小球系膜細胞增生和基質的過多產生是多種腎小球腎炎的主要病理表現。腎小球系膜細胞的培養是研究系膜擴張、瘢痕形成和腎小球硬化的理想方法。系膜細胞的主要作用可能有：①收縮作用，入球小動脈和出球動脈的收縮作用受系膜細胞的調節，以影響毛細血管袢的內壓和濾過率；②支持作用，它填充于毛細血管袢之間，支持毛細血管的位置；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜內的大分子物質和蛋白質；④分泌腎素，在腎缺血或免疫復合物沉積時，系膜細胞增生且分泌腎素。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈成纖維細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
小鼠樹突狀細胞
小鼠腎小球系膜細胞
正常人食管鱗狀上皮細胞
人正常食管上皮細胞
團頭魴尾鰭細胞
白鰱尾鰭細胞系
散鱗鏡鯉尾鰭細胞
人胎兒胸腺細胞株
人胚肺細胞VA13細胞
小鼠皮下結締組織細胞
兔角膜前基質層成纖維細胞
新生牛眼晶體上皮細胞
CF-1小鼠胚胎成纖維細胞，經射線處理，P3,100萬細胞（干細胞庫保藏）
小鼠胚胎成纖維細胞，經射線處理，P3,300萬細胞（干細胞庫保藏）
人胚胎眼鞏膜成纖維細胞
產琥珀酸放線桿菌Actinobacillus succinogenes
產黃纖維單胞菌Cellulomonas flavigena(Kellerman et McBeth) Bergry et al.
產堿假單胞菌Pseudomonas alcaligenes
產堿普羅菲登斯菌Providencia alcalifaciens (de Salles Gomes) Ewing
產堿普羅威登斯菌Providencia alcalifaciens
產硫芽孢桿菌Bacillus thioparans
產酶溶桿菌產酶亞種Lysobacter enzymogenes subsp. enzymogenes
產氣腸桿菌Klebsiella aerogenes
產氣弧菌Vibrio aerogenes
產氣莢膜梭菌Clostridium perfringens
人腎小球系膜細胞產氣莢膜梭菌 毒素A型Clostridium perfringens Type A
產氣柯林斯氏菌Collinsella aerofaciens
產氣克雷伯氏菌Klebsiella aerogenes Tindall et al.
產氣克雷伯氏菌定量菌株Quantitative strains of klebsiella aerogenes
產氣克雷伯氏菌基因組DNAGenomic DNA from Klebsiella aerogenes Tindall et al.
化工儀器網