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上海慧穎生物科技有限公司

NK-92MI 細胞傳代方法

時間:2020-5-21閱讀:2440

NK-92MI 細胞傳代方法 慧穎生物墻裂推薦

產品名稱:NK-92MI 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

貨號:H103

種屬:人

來源:ATCC/中科院/協和醫院等地引進

生長狀態:懸浮 淋巴母細胞養 成團聚集

培養條件:培養基:a-MEM(無核酸,有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉) +43.2μg/mL Inositol+8.82μg/mL Folic acid+0.1mM 2-巰&基乙醇+12.5%FBS+12.5%HS+1% P/S(推薦HAKATA優等胎牛血清,貨號:HN-FBS-50; 馬血清,貨號:HM-FBS-50)

溫度:37℃     氣相:95%空氣,5% CO2

傳代方法:

用75%酒精噴灑整個培養瓶消毒,將其豎直置于培養箱中進行2-4小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,小心吸取上層培養基,留2-4ml培養基以將大部分細胞留在培養瓶底部,加入新鮮培養基。吸取出的舊培養基1000r/min 離心5min后,去除上清,根據細胞數量決定是合到一起還是另行取新培養瓶培養。根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液或傳代,每2至3天加入新鮮培養基(根據細胞密度),盡量少用離心的方式換液;

通過添加新鮮培養基來維持培養。或者可以通過離心去除舊培養基,再加入新培養基并以2-3×105個活細胞/mL的密度再懸浮進行培養。建議將細胞密度維持在2×105個至1×106個細胞/mL之間。當細胞團過大時可輕輕吹打成小細胞團,不要吹打過度。

常見問題及解決方案:

1.培養瓶有破裂,培養液有漏液:細胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。

2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養基,如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加 10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間長不宜超過 72 小時)

3.細胞漂浮:培養瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2小時后觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留8-10ml培養液培養觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養瓶,原培養瓶加部分培養液繼續培養,中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。

保存方法:

凍存條件:90%FBS+10%DMSO

(備注:建議使用本公司的冷凍液(H-W-100),用4度保存的冷凍液直接重懸細胞,不能預熱后使用。)

保存條件:液氮存儲

僅供研究之用

來源:慧穎生物,盜圖必究

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