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上海慧穎生物科技有限公司

293T細胞培養操作流程

時間:2015-3-30閱讀:4422

293T細胞培養操作流程


1 目的 293T細胞是常用于包裝和擴增病毒載體的工具細胞,因此做好293T細胞的培養,為保證相關實驗的正常進行提供必要條件。

2 適用范圍 本部門293T細胞培養

3 操作方法

3.1 將移液器和移液槍、15ml離心管、離心管架、75cm2新的細胞培養瓶放于生物安全柜中,按照生物安全柜的標準操作規程,將生物安全柜的紫外開啟半小時。

3.2 將含10%胎牛血清和100U/ml雙抗的DMEM及PBS放于37℃水浴鍋中預熱。

3.2.1 將已長到80%-90%的293T細胞培養瓶從37℃,5%的CO2培養箱中取出,先用75%的酒精噴灑于瓶表面,將細胞培養瓶旋轉放于生物安全柜中,用無菌的移液管吸凈其中的培養基,加5ml的預熱的PBS洗滌一次,吸凈PBS。

3.2.2 將含EDTA-0.25%tyption用PBS稀釋兩陪到五倍,向該75cm2的細胞瓶中加入3ml稀釋好的EDTA-0.25%tyption,讓其充分平鋪于細胞表面。蓋好瓶蓋,將細胞瓶放在顯微鏡下觀察,直到細胞變圓,加含10%胎牛血清的DMEM終止反應,用移液管輕輕將瓶上的細胞吹下,將細胞液移到15ml無菌的離心管中,1000rpm離心3分鐘。

3.2.3 將離心上清吸棄掉,用手指輕輕拍打離心管底將底部細胞分散開,再加3mlDMEM培養基將分散的細胞重懸稀釋開,取一定量的細胞液進行n倍稀釋后計數,按照細胞計數標準操作規程進行。

3.2.4 計數好之后細胞傳代密度按照2~5×104個細胞/cm2進行傳代培養,每個75cm2的培養瓶中加10mlDMEM培養基,放于37℃,5%的CO2培養箱中培養。

3.2.5 24小時后觀察細胞狀態,待細胞長到80%-90%時進行下一次傳代培養。

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