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士鋒科技淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體制備方法
點擊次數：1919 發布時間：2013-7-18
制備單克隆抗體包括動物免疫、細胞融合、選擇雜交瘤、檢測抗體、雜交瘤細胞的克隆化、凍存以及單克隆抗體的大量生產，要經過幾個月的一系列實驗步驟，下面按照制備單克隆抗體的流程順序，逐一介紹其實驗方法。
一、細胞融合前準備
（一） 免疫方案
選擇合適的免疫方案對于細胞融合雜交的成功，獲得高質量的McAb至關重要。一般要在融合前兩個月左右確立免疫方案開始初次免疫，免疫方案應根據抗原的特性不同而定。
1. 顆粒性抗原免疫性較強，不加佐劑就可獲得很好的免疫效果。下面以細胞性抗原為例的免疫方案:
初次免疫 1×10７／0.5ml ip （腹腔內注射）
↓ 2～3周后
第二次免疫 1×10７／0.5ml ip
↓ 3周后
加強免疫（融合前三天） 1×10７／0.5ml ip或iv（靜脈內注射）
↓
取脾融合
2. 可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐劑，常用佐劑：福氏*佐劑，福氏不*佐劑。要求抗原和佐劑等體積混合在一起，研磨成油包水的乳糜狀，放一滴在水面上不易馬上擴散呈小滴狀表明已達到油包水的狀態。商品化福氏*佐劑在使用前須振搖，使沉淀的分枝桿菌充分混勻。
初次免疫 Ag 1～50μg 加福氏*佐劑皮下多點注射
│ （一般0.8～1ml 0.2ml／點）
↓3周后
第二次免疫 劑量同上，加福氏不*佐劑皮下或ip
│ （ip劑量不宜超過0.5ml）
↓3周后
第三次免疫 劑量同上，不加佐劑，ip
│ （5～7天后采血測其效價，檢測免疫效果）
↓2～3周后
加強免疫，劑量50～500μg為宜，ip或iv
↓3天后
取脾融合
取脾融合
目前，用于可溶性抗原（特別是一些弱抗原）的免疫方案也不斷有所更新，如①將可溶性抗原顆粒化或固相化，一方面增強了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改變抗原注入的途徑，基礎免疫可直接采用脾內注射。③使用細胞因子作為佐劑，提高機體的免疫應答水平，促進免疫細胞對抗原反應性。
（二） 飼養細胞
在制備單克隆抗體過程中，許多環節需要加飼養細胞，如：在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養過程中，加入飼養細胞是十分必要的。常用的飼養細胞有：小鼠腹腔巨噬細胞（較為常用）、小鼠脾臟細胞或小鼠胸腺細胞，也有人用小鼠成纖維細胞系3T3經放射線照射后作為飼養細胞，使用比較方便，照射后可放入液氮罐長期保存，隨用隨復蘇。