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士鋒生物微量定容測壓法測定植物的呼吸速率
點擊次數(shù)：1082 發(fā)布時間：2014-3-10
一、原理
微量檢壓計不僅用來研究有機體或部分組織的呼吸作用和發(fā)酵作用，而且也可以研究有關(guān)O2與CO2及其它氣體交換的反應(yīng)。如光合作用，酶的活性等。測壓法的原理是在固定體積并保持恒溫的密閉系統(tǒng)中，氣體產(chǎn)生或消失的總量，可以利用氣體定律計算求得。
二、材料、儀器設(shè)備及試劑
（一）材料：待測的小麥、水稻萌發(fā)種子。
（二）儀器設(shè)備：1. 瓦布格呼吸計（微量呼吸檢質(zhì)計）；2. 移液管；3. 量筒；4. 小鑷子；5. 稱量瓶。
（三）試劑：1. 20％KOH；2. 凡士林；3. 橡皮筋數(shù)根；4. 吸水紙；5. Brodie氏溶液：NaCl 23g，牛膽酸鈉5g，溶于500ml水中，另加少許染料（酸性品紅）使溶液染色，并加數(shù)滴濃麝香草酚酒精溶液作為防腐劑。
三、實驗步驟
（一）種子吸氧量的測定
1. 取不同處理種子若干（體積約0.5ml左右），稱其鮮重，然后用排水法測定其體積，先用濾紙將種子外面水分吸干，另取10ml量筒一個，內(nèi)盛4～5ml的水，將種子放入量筒內(nèi)觀察水分上升體積，二次水分體積之差即為種子體積，將種子取出，用濾紙吸干附在種子外表的水分，然后將種子放入反應(yīng)瓶的底部，再加0.5ml水
2. 在中央小槽內(nèi)加入20％KOH0.2ml，為了增大吸收CO2的能力，可用1×2cm濾紙折疊后插入中央小槽內(nèi)。并在中央小槽口上涂上少量凡士林，防止堿液逸出。
3. 側(cè)管的玻璃棒涂以凡士林后塞緊。壓力計口亦涂上凡士林和反應(yīng)瓶連接，轉(zhuǎn)動反應(yīng)瓶，使封口凡士林呈透明為止，然后用橡皮筋將反應(yīng)瓶固定在壓力計上。
4.將壓力計固定在水槽上，并打開活塞，平衡10～15min，在此過程中要檢查反應(yīng)瓶是否漏氣。
（二）空白試驗（作溫壓計用）：因壓力計左管口是與大氣相通，實驗時室內(nèi)氣壓或水槽溫度微小變化對讀數(shù)均有影響，為此，必須進行校正。校正方法：即反應(yīng)瓶中除不加種子外，其他處理與測壓計*相同。
（三）測定：當(dāng)反應(yīng)瓶內(nèi)溫度與水槽溫度平衡后，將壓力計上的活塞關(guān)閉。開始振蕩。并記錄開始時間，每隔15min記錄測壓計及溫壓計左管液面高度，讀數(shù)時關(guān)閉振蕩器，并將壓力計的右管液面調(diào)至150mm處，再記錄左管液面高度，共計四次（共1h，讀數(shù)時不能將活塞打開！）將結(jié)果按下表記錄。
四、結(jié)果計算（一）求K值（二）根據(jù)實際壓力差值（h1.求氧的吸收量（μl）＝h×K；
計算呼吸速率（耗O2）呼吸速率（μl/g/h）＝h×K/