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士鋒生物細菌的染色檢查法
點擊次數：946 發布時間：2014-3-28
作細菌染色檢查，首先要制備細菌涂片。制備細菌涂片一般包括涂片、干燥、固定三步。
1．涂片：取潔凈玻片一張，按以下步驟操作
肉湯培養物涂片：
① 右手拿接種環的黑色膠柄部分，左手托持試管。
② 接種環以15°角置于酒精燈的外焰中燒灼滅菌，直至金屬絲燒紅(圖1-3)，然后將金屬柄部也回旋通過火焰燒灼滅菌。
③ 用右手小指和手掌小魚肌側拔掉左手所持試管的棉塞，并立即火焰燒灼試管口滅菌。
④ 用已滅菌冷卻的接種環伸入試管中取出菌液(圖1-4)。注意勿使沾有菌液的接種環觸及試管壁及試管口。
⑤ 再次滅菌試管口，將棉塞在火焰上略加燒灼（時間要短，以免點燃棉塞），塞好棉塞，放回原處。
⑥ 將接種環上之菌液涂于載玻片上，制成的菌膜直徑約1cm左右。然后將接種環用火焰燒灼滅菌。為防止細菌濺散污染環境，接種環滅菌前，須先將接種環靠近火焰或放內焰中烤干，然后再在外焰中燒紅滅菌，殺死殘留的細菌。液體標本（如膿液、痰液等）均可照此法涂片
斜面培養物涂片：
用細菌斜面（或平板）培養物涂片，需預先取一接種環無菌生理鹽水置于載玻片上，然后再按上述無菌操作法從斜面培養物上取少量菌苔，放入生理鹽水內輕輕研勻，制成直徑lcm左右的菌膜。
如有多個標本行同一方法染色時，可用蠟筆在玻片上劃出數格，做好標記再分別進行涂片，以免混淆。
2、干燥：
涂片在室溫中自然干燥，如需加速干燥，可將標本向上小心地放置離火焰半尺高處，略烘促使干燥，切不可在火焰上燒干。
3、固定：
常用加熱固定法。涂片干燥后，讓玻片有菌膜的面向上，在火焰的zui熱部分迅速通過三次。固定之目的是使細菌蛋白變性，菌體牢固黏附于玻片上，還可殺死細菌，改變菌體對染料的通透性。
以上步驟完成后，便可進行各種染色。
（二）革蘭（Gram）染色法
革蘭染色是細菌學中使用zui廣泛的一種染色方法，籍此染色法，可將所有細菌區分為兩大類。
【材料】金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大腸桿菌(Escherichia coli，E．coli)24h斜面培養物、革蘭染色液、生理鹽水、載玻片、接種環等。