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士鋒生物天然產(chǎn)物中多糖的分離、純化與鑒定
點(diǎn)擊次數(shù)：890 發(fā)布時(shí)間：2014-5-5
多糖類物質(zhì)是除蛋白質(zhì)和核酸之外的又一類重要的生物大分子。早在60年代，人們就發(fā)現(xiàn)多糖復(fù)雜的生物活性和功能。它可以調(diào)節(jié)免疫功能，促進(jìn)蛋白質(zhì)和核酸的生物合成，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長，提高生物體的免疫力，具有抗腫瘤、抗瘍和抗愛滋病(AIDS)等功效。
由于高等真菌多糖主要是細(xì)胞壁多糖，多糖組分主要存在于其形成的小纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)交織的基質(zhì)中，利用多糖溶于水而不溶于醇等有機(jī)溶劑的特點(diǎn)，通常采用熱水浸提后用酒精沉淀的方法，對(duì)多糖進(jìn)行提取。影響多糖提取率的因素很多，如：浸提溫度、時(shí)間、加水量以及脫除雜質(zhì)的方法等都會(huì)影響多糖的得率。
多糖的純化，就是將存在于粗多糖中的雜質(zhì)去除而獲得單一的多糖組分。一般是先脫除非多糖組分，再對(duì)多糖組分進(jìn)行分級(jí)。常用的去除多糖中蛋白質(zhì)的方法有：Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，這些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白質(zhì)沉淀，其中Sevag方法脫蛋白效果較好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4：1比例混合，加到樣品中振搖，使樣品中的蛋白質(zhì)變性成不溶狀態(tài)，用離心法除去。
本實(shí)驗(yàn)采用Sevag法(氯仿：正丁醇＝4：1混合搖勻)進(jìn)行脫蛋白，用DEAE Sepharose層析柱進(jìn)行純化，然后合并多糖高峰部分，濃縮后透析，凍干，得多糖級(jí)分。
試劑和器材
一、試劑
平衡緩沖溶液：0.01mol/L Tris-HCL, PH=7.2。
洗脫液：A: 0.1mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2; B: 0.5mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2。
氯仿、正丁醇、乙醇(95％)等，均為分析純。
二、材料
灰樹花子實(shí)體。
三、
器材
DEAE Sepharose Fast Flow，旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)儀，搖床，離心機(jī)，層析柱：26×10。
操作方法
一、粗多糖的提取
將多糖子實(shí)體切碎烘干后稱量，采用熱水浸提法，每次原料和水之比均為1：5，浸提溫度為70℃－80℃，浸提時(shí)間3－5h，共提取4次，合并4次浸提液。真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，濃縮一倍體積。對(duì)多糖提取液需進(jìn)行脫色處理，即以1％的比例加入活性炭，攪拌均勻15min后過濾即可。在濃縮液中加入3倍體積的乙醇攪拌，沉淀為多糖和蛋白質(zhì)的混合物，此為粗多糖。 它只是一種多糖的混合物，其中可能存在中性多糖、酸性多糖、單糖、低聚糖、蛋白質(zhì)和無機(jī)鹽，必須進(jìn)一步分離純化。