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士鋒生物淀粉酶的活力測(cè)定及專(zhuān)一性實(shí)驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù)：1091 發(fā)布時(shí)間：2014-5-12
酶與一般催化劑zui主要的區(qū)別之一是它具有高度的專(zhuān)一性。所謂專(zhuān)一性指的是一種酶只能對(duì)一種化合物或一類(lèi)化合物（通常在這些化合物的結(jié)構(gòu)中具有相同的化學(xué)鍵）起一定的催化作用，而不能對(duì)別的物質(zhì)發(fā)生催化反應(yīng)。例如，淀粉酶只作用于淀粉中的a-1,4葡萄糖苷鍵，而不能作用于蔗糖分子中a-D-吡喃葡萄糖的C1和b-D-呋喃果糖的C2之間的糖苷鍵。
蔗糖無(wú)還原性，淀粉的還原性也極小，它們對(duì)3,5-二硝基水楊酸試劑（DNS試劑）呈陰性反應(yīng)，而唾液淀粉酶（主要含a-淀粉酶）水解淀粉后的產(chǎn)物則為還原性糖，與DNS試劑共熱呈陽(yáng)性反應(yīng)，產(chǎn)生紅棕色。據(jù)此可以檢驗(yàn)蔗糖和淀粉有無(wú)被唾液淀粉酶水解，從而了解酶作用的專(zhuān)一性。
酶活力也稱(chēng)酶活性，是以酶在zui適溫度、zui適pH等條件下，催化一定的化學(xué)反應(yīng)的初速度來(lái)表示。本實(shí)驗(yàn)是以一定量的唾液淀粉酶液，于37°C、pH6.8的條件下，在一定的初始作用時(shí)間里將淀粉轉(zhuǎn)化為還原糖，然后通過(guò)與DNS試劑作用，比色測(cè)定，求得還原糖的生成量，從而計(jì)算出酶反應(yīng)的初速度，即酶的活力。這里規(guī)定，一個(gè)淀粉酶活力單位定義為在37°C、pH6.8的條件下，每分鐘水解淀粉生成1mg還原糖所需的酶量。
三. 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
1. 材料
唾液
2. 儀器
分光光度計(jì) 恒溫水浴 沸水浴
3. 器材
刻度試管： 25mL×10
容 量 瓶： 100mL×1
移 液 管： 1mL×4 2mL×2
燒 杯： 250mL×1
滴 管： 2
洗 耳 球： 2
洗瓶、試管架、移液管架、玻棒：各1
四. 試劑的配制
1. 淀粉溶液（0.5%）
稱(chēng)取5g可溶性淀粉，溶于1000mL熱水中。（臨用前配制）
2. 蔗糖溶液（1%）
3. 3,5-二硝基水楊酸試劑（DNS試劑）
將5.0g 3,5-二硝基水楊酸溶于200mL 2N NaOH溶液中（不適宜用高溫促溶），接著加入500mL含130g酒石酸鉀鈉的溶液，混勻。再加入5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解后，定容至1000mL。暗處保存?zhèn)溆谩?nbsp;
4. 磷酸緩沖液（0.2mol/L，pH6.8）
5. NaOH溶液（6mol/L）
6. NaCl溶液（0.3%）
五. 操作步驟
1. 唾液淀粉酶的制備
(1) 提取：實(shí)驗(yàn)者先用水漱口清潔口腔，然后含一小口（約5mL）蒸餾水于口中輕嗽一、二分鐘。
(2) 過(guò)濾：將口腔中的酶提取液用一層脫脂棉過(guò)濾。
(3) 稀釋?zhuān)喝V液1mL，用水定容至100mL。作為淀粉酶的樣品液。
（由于不同人或同一人不同時(shí)間收集到的唾液淀粉酶的活性并不相同，稀釋倍數(shù)可以是50～300倍，甚至超過(guò)此范圍。）
2. 唾液淀粉酶的專(zhuān)一性實(shí)驗(yàn)
取4支試管，按表一編號(hào)并操作，記錄所觀察到的顏色。
3. 唾液淀粉酶活力的測(cè)定
取25mL刻度試管5支，按表二編號(hào)并操作，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
淀粉酶的活力測(cè)定及專(zhuān)一性實(shí)驗(yàn)
六. 結(jié)果處理
1. 解釋表一的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2. 根據(jù)表二的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并利用實(shí)驗(yàn)四“3,5-二硝基水楊酸比色法測(cè)定糖的含量”中制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算每毫升新鮮唾液含有淀粉酶的活力單位。