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如何檢測血漿高密度脂蛋白
點擊次數：1539 發布時間：2014-5-16
高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）是血漿脂蛋白的一種。zui初由肝臟和小腸合成，新分泌至血液中時呈圓盤狀，為新生HDL。在循環中或組織間液中經卵磷脂：膽固醇脂酰基轉移酶（LCAT）的催化下，與細胞膜及其它脂蛋白相互作用，使新生HDL顆粒表面的膽固醇接受磷脂的脂酰基而生成膽固醇酯。此非極性的膽固醇酯部分進入疏水的核心，使盤狀的HDL逐漸轉變成球形的成熟的HDL。HDL不僅能與其它脂蛋白相互作用接受其組成成分，而且還能將組織細胞的膽固醇運輸到肝臟而代謝。HDL是有蛋白質、磷脂、膽固醇、三酯酰甘油按一定比例組成的。大量的流行病學研究表明，血漿HDL的水平與冠心病的發病率呈負相關，高水平的HDL有利于預防冠心病的發生。
一定濃度的肝素-Mg2+混合液在一定條件下，可選擇性地使血漿中的VLDL及LDL沉淀下來，而HDL仍保留在上清夜中，從而使HDL與VLDL及LDL分開。HDL中含有一定量的膽固醇。利用膽固醇的類脂性質，可用有機溶劑進行抽提，然后取一定量的抽提液蒸干，加入冰醋酸，利用Zak氏三氯化鐵顯色法使溶解于冰醋酸中的膽固醇在硫酸存在的條件下與高鐵離子作用，產生穩定的紅色物質。此物質在560nm的波長處有zui大的吸收峰，可作定量分析。
【器材】
721分光光度計、離心機、離心管、試管、刻度吸管
【試劑】
1．標準膽固醇應用液：
A.貯存液（1000μg /ml）：準確稱取標準膽固醇100mg，溶于100ml 三氯化鐵-冰醋酸溶液中。
B.應用液（40μg /ml）：取貯存液2ml，加三氯化鐵-冰醋酸液至100ml。
2．三氯化鐵-冰醋酸液：
A．貯存液（125mg/ml）：稱取三氯化鐵12.5g，溶于100ml 冰醋酸中。
B．應用液（1mg/ml ）：取貯存液2ml，加入冰醋酸至250ml。
3．濃硫酸（AR）：
4．丙酮-乙醇混合液（V/V=1：1）
5．肝素-錳混合液：
A． 1·06mol/L 氯化錳（MnCl2·4H2O）：稱取209.8g MnCl2·4H2O，溶于1000ml水中。
B．.肝素液（280mg/ml）：稱取肝素280mg，溶于10ml氯化錳蒸餾水中。
C． .肝素--錳混合液：取A液10ml ，B液0. 6ml混勻。臨用前配制，至多用一個月。
【操作步驟】
HDL的分離：
1．取干燥的離心管一支，加1.0ml血漿，加肝素--錳混合液0.1ml，混勻后置室溫10分鐘，3000rpm/min 離心10分鐘。沉淀部分為VLDL和LDL，而HDL存在于上清中。
2．HDL中膽固醇的提取：
取上清液0.2ml，加丙酮-乙醇混合液5.0ml（快速加入，使沉淀均勻），3000rpm/min 離心5~6分鐘，取上清夜2.0 ml于試管A中（作為測定管），置沸水浴中蒸干（沉淀部分為脂蛋白中的蛋白質）。
3．膽固醇測定；