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士鋒生物肝糖原的提取及鑒定
點擊次數(shù)：1951 發(fā)布時間：2014-5-22
糖原屬于高分子糖類化合物，是動物體內(nèi)糖的主要儲存形式，在肝臟內(nèi)儲量較為豐富。糖原在體內(nèi)的合成與分解代謝，對血糖濃度的調(diào)節(jié)起著重要的作用。
糖原微溶于水，無還原性，與碘作用生成紅色。常用的提取肝糖原的方法是將新鮮的肝組織與石英砂共同研磨以破壞肝組織，加入三氯醋酸溶液沉淀其中的蛋白質(zhì)，離心除去沉淀。上清液中的肝糖原則通過加入乙醇沉淀而得。將沉淀的糖原溶于水，取一部分加入碘觀察顏色反應，另一部分經(jīng)酸水解成葡萄糖后，用斑氏試劑(Benedict)檢驗。
三、儀器、原料和試劑
儀器
研缽、離心機、離心管、電爐、廣泛試紙、濾紙、試管等。
原料
新鮮動物肝臟
試劑
1. 10%的三氯醋酸溶液
2. 5%的三氯醋酸溶液
3. 95%乙醇
4. 濃鹽酸
5. 20%的NaOH 溶液
6. 碘液：碘1g、碘化鉀2g 溶于500mL 蒸餾水中。
7. 斑氏試劑將硫酸銅17.3g 溶于100mL 溫蒸餾水中；將檸檬酸鈉173g 和無水碳酸鈉100g 溶于
700mL 溫蒸餾水中，冷卻；將硫酸銅溶液攪拌下緩緩加入檸檬酸和碳酸鈉混合液中，zui后用蒸餾水稀釋至1000mL。
四、操作步驟
(一)肝糖原的提取
稱取1g 左右新鮮動物肝臟至研缽中，加入少許石英砂以及1mL10%的三氯醋酸溶液，研磨至糜狀再加入2mL5%的三氯醋酸繼續(xù)研磨片刻，使成均勻糜漿，轉(zhuǎn)入離心管中，2500r/min 離心10min。取上清液于另一離心管中，加入等體積的95%乙醇，混勻后靜置片刻，使糖原呈絮狀析出，再放入離心機2500r/min 離心10min。棄去上清液，將離心管倒置于濾紙上。
(二)肝糖原的鑒定
向肝糖原沉淀中加入1mL 蒸餾水，用細玻棒攪拌至溶解，得糖原溶液。
1.取小試管2支，一支加入糖原溶液10滴，另一支加入蒸餾水10滴，然后兩管再各加入碘液2滴，混勻。觀察管中顏色變化，并解釋現(xiàn)象。
2.在剩余糖原溶液內(nèi)加入濃鹽酸3滴，放入沸水浴中加熱10min，取出冷卻，用20%的NaOH 溶液中和至中性(pH 試紙檢測)。加入斑氏試劑2mL，再置沸水浴中加熱5min，取出冷卻。觀察管中沉淀的生成，并解釋現(xiàn)象。